安捷伦液相色谱柱介绍与选择（培训资料）

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1、液相色谱分离速度提高及选择性优化安捷伦液相色谱柱介绍与选择HowtofastyourLCseparation1AgilentLCcolmns2008.10.23Dalian液相色谱方法开发中如何选择色谱柱？1.根据样品特性选择分离模式2.色谱柱的适应性和选择性3.色谱柱规格的选择我要一根ODS柱HowtofastyourLCseparation2AgilentLCcolmns2008.10.23Dalian1HPLC模式选择硅胶的正相色谱溶于正己烷用不同键合相的正相色谱溶于有机溶剂溶于甲醇或甲醇/水用不同键合相的反相色谱或乙腈或乙腈/水用不同键合相的反相色谱分子量<2,000溶于

2、四氢呋喃低分子凝胶渗透色谱用不同键合相的反相色谱溶于水非离子化抑制电离反相键合相色谱离子对键合相的反相色谱样品离子化硅胶基质的反相色谱离子交换色谱溶于有机溶剂凝胶渗透色谱分子量>2,000凝胶过滤色谱溶于水大孔填料的离子交换色谱用大孔填料的反相色谱HowtofastyourLCseparation3AgilentLCcolmns2008.10.23Dalian分离模式的选择实例-三聚氰胺分析三聚氰胺是强极性，弱碱性化合物（pKa=8），微溶于水。模式一：离子对键合相的反相色谱对应国标方法GB/T22388-2008第一法（反相离子对方法）流动相：离子对试剂（辛烷磺酸钠）溶液：乙腈

3、＝92:8色谱柱：ZORBAXSB-C84.6x250mm,5um模式二：硅胶基质的反相色谱（HILIC）模式三：离子交换色谱对应安捷伦开发的HILIC模式方法对应安捷伦开发的离子交换方法流动相：10mM乙酸铵：ACN=11：89流动相：50mM甲酸铵(pH3.0):乙腈=15:85色谱柱：ZorbaxRx-Sil,2.1×150mm,5um色谱柱：ZORBAX300SCX4.6×150mm,5umHowtofastyourLCseparation4AgilentLCcolmnsPage42008.10.23Dalian2液相色谱方法开发中如何选择色谱柱？1.根据样品特性选择分离

4、模式2.色谱柱的适应性与选择性适应性：色谱柱的耐受范围选择性：不同色谱柱对同一样品的分离不同3.色谱柱规格的选择HowtofastyourLCseparation5AgilentLCcolmns2008.10.23Dalian不同反相色谱柱的pH适应范围ExtendC18pH2~11.5Bonus-RPpH2~9EclipsePLUS/XDBC18pH2~9AgilentTC/HCpH2~8/9StableBondC18pH1~8pHHowtofastyourLCseparation6AgilentLCcolmns2008.10.23Dalian3选择性、柱效、保留对分离度的影响

5、选择性对分离度的影响最大7.00•优化键合相方法开发首要因素•优化流动相6.005.004.00IncreaseNIncreaseAlphaIncreasek'3.00Resolution2.001.00Rs=N½/4•(α-1)/α•k’/(k’+1)0.00123456789101112131415161718192021Plates:500010000150002000025000Alpha:1.101.351.601.852.1k’:2.04.57.09.512.0HowtofastyourLCseparation7AgilentLCcolmns2008.10.23Dal

6、ian液相色谱柱选择性比较–以酸碱混合物为例SulfamethoxazoleBarbitalAcid(pKa5.6)Neutral(pKa80)Neutral(pKa8.0)H3COONHONH5C2NHNHSO2H5C2OCaffeineBase(pKa14.0)NH2CH3OH3CNNNONCH3HowtofastyourLCseparation8AgilentLCcolmns2008.10.23Dalian4酸碱混合物在XDB及SB上分离比较322&32SB-C18SB-C8SB-PhenylSB-CN21313110510051015051015200510Time(mi

7、n)Time(min)Time(min)Time(min)322XDB-C18XDB-C8XDB-Phenyl32311105100510051015Time(min)Time(min)Time(min)(1)Barbital(2)Sulfamethoxazole(3)CaffeineColumns:4.6x75mm,3.5μmMobilePhase:80%25mMNaH2PO4,pH3.0:20%MeOHFlowRate:1.0mL/minTemperature:35°CUV2