钙调素拮抗剂EBB抗白血病作用的实验研究

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1、中国协和医科大学硕士学位论文钙调素拮抗剂EBB抗白血病作用的实验研究姓名：邹凌琳申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：朱惠芳20070501

2、r国协和区科太学中国正学科学芘硕士学位论文中文摘要目的：研究CaM拮抗剂双苄基异喹啉类化合物小檗胺类衍生物0-4．乙氧基-丁基．小檗胺【O一(4-ethoxiyl-butyl)-berbamine，EBB]在体外对敏感和多药耐药白血病细胞的杀伤作用，明确其抗耐药白血病的潜能并阐明作用机制，以寻求抗耐药白血病的新药。方法：以敏感K562细胞和对阿霉素耐药的K562／A02细胞为研究对象，采用MTT法

3、在体外评价不同浓度EBB对白血病细胞的杀伤作用；用AnnexinV-FITC／PI双染色流式细胞术检测EBB对细胞凋亡的影响；以发光计检测EBB作用后细胞内ATP含量的变化；并用荧光分光光度计检测细胞内活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)水平的改变；在激光共聚焦显微镜下观察EBB处理前后细胞内ca2+含量及分布的差异，以研究EBB体外抗耐药白血病的作用及其作用机制。结果：1．EBB作用72小时后对K562和K562／A02细胞生长均有抑制作用，其ICso值分别为8．221xM和8．97pM，作用强度随着药物浓度的升高逐渐增加。2

4、．EBB作用24小时能诱导K562和K562／A02细胞凋亡(PO．05)，但坏死率明显增加(P

5、OS生成的能力随浓度升高和作用时间延长而增强，3btM处理2小时就能提高两种细胞内ROS水平，作用8小时出现ROS高峰；随后ROS水平逐渐下降，至24小时略低于处理前水平；EBB诱导ROS变化的趋势与幅度在两种细胞间无明显差异。5．K．562／A02细胞内的Ca2+浓度低于K562细胞，EBB作用24小时能明显增加两种细胞中的ca2+浓度，并能使耐药细胞内的Ca2+水平超过敏感细胞。结论：EBB对耐药K562／A02细胞和敏感K562细胞都有明显的杀伤作用。其抗白血病作用通过诱导细胞凋亡和发挥细胞毒作用的双重途径来实现。白血病是一类恶性疾病严重危害着人

6、类的健康，多药耐药一直是白血病治疗上的难题，低毒高效的抗耐药白血病药物倍受期待。EBB除了具有较强的抗耐药白血病作用之外，对正常细胞毒性很低，因而有望成为一种抗白血病特别是抗耐药自血病的新药。关键词：钙调素拮抗剂，EBB，耐药，白血病细胞中国协和正斜太学中国正学斜学览碛士学位论文EffectofCaimodulinantagonistEBBonleukemiaABSTRACTobieetlveInthepresentstudy,wedissectouttheanti—leukemiaeffectsandmechanismsof0一(4·ethoxiyl

7、—butyl)-berbamine(EBB)，aderivativeofbisbenzylisoqunolinealkaloid，onbothmultidrugresistsnt(MDR)leukemiacellsK562／A02anditsparentcellsK562invitro．MethodsMTTassayWasusedtoevaluatethecytotoxicityofEBBonK562cellsandK562／A02cells．Flowcytometryanalysiswasusedtodetectapoptosisofthecells

8、intheprescenceorabscenceofEBB．ThechangeofATPeoncemtrationandthereactiveoxygenspecies(Ros)productionweredeterminedbyLuminometerandFluorescencespectrophotomcter,respectively．TheeffectsofEBBOncytosolicCa，wereobservedbyconfocalmicroscopy．Results1．TheICsotoEBBofK562／A02anditsparentK5

9、62cellsale8．22and8．97洲，respectively,inadose-dep