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《研究报告ResearchPaper溶原性噬菌体在猪链球菌型分离株中的检》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、ResearchPaper研究报告微生物学报ActaMicrobiologicaSinica48(4)：508~513;4April2008ISSN0001-6209;CN11-1995/Qhttp://journals.im.ac.cn溶原性噬菌体在猪链球菌2型分离株中的检出和鉴定*马玉玲,陆承平,范红结(南京农业大学农业部动物疫病与免疫重点实验室,江苏南京210095)摘要：【目的】为了研究噬菌体整合酶基因在猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)中的分布情况。【
2、方法】根据噬菌体整合酶基因设计引物,建立了PCR方法,并对扩增产物进行测序。【结果】结果显示,25株SS2致病菌株均扩增出目的片段,非毒力株T15、5株其它血清型猪链球菌及兰氏C群猪源链球菌未扩增出目的片段。经丝裂霉素C诱导后,SS2致病菌株出现完全的细胞溶解,而非毒力株T15未出现溶解。SS2致病株HA9801和ZY05719诱导均产生溶原性噬菌体,分别命名为SS2-HA和SS2-ZY,电镜观察,二者均头部呈正六边形,无尾部,其核酸类型为dsDNA,可鉴定为复层噬菌体科(Tectivirida
3、e)的成员。噬菌体SS2-HA和SS2-ZY整合酶基因序列与已报道的SS2噬菌体整合酶基因序列高度同源,显示SS2噬菌体整合酶具有较高的特异性。【结论】从SS2致病株中检出溶原性噬菌体和噬菌体整合酶基因,且噬菌体整合酶基因与SS2溶菌酶释放蛋白(mrp)等7种毒力相关基因有相关性,表明SS2的溶原性噬菌体可能与其致病性有关。关键词：猪链球菌2型;溶原性噬菌体;诱导中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：0001-6209(2008)04-0508-06SS2是一种革兰氏阳性菌,在全世界
4、广泛分布,与1材料和方法[1]仔猪的脑膜炎、关节炎、心内膜炎等有很大的关联。1.1材料此外,也可引起人的脑膜脑炎、心内膜炎及永久性的1.1.1菌株和培养基：SS2型菌株、猪链球菌1型、[2]听力丧失。该菌可以定殖于猪的扁桃体,在猪群有[3]7型、9型、和兰氏C群共32个菌株由本实验室保存,很高的携带率。SS2菌株可分为毒力株、弱毒力株[4]1998-2005从江苏、上海、四川等地分离,详情见表1。和无毒力株。已知的毒力因子有溶菌酶释放蛋白、无毒力株T15由荷兰SmithHE博士惠赠。培养猪链胞外
5、因子、溶血素、荚膜多糖等,但并不能完全解释[5]球菌及分离噬菌体所用的培养基为THB培养基。制强弱菌株的差异。最近的研究表明,基因交换是猪备双层平板时,上层加0.7%的琼脂,下层加1.5%的链球菌菌群进化过程中的一个重要环节,其中包括[6,7]琼脂。如溶血素等毒力因子的多种组合。此外,King等1.1.2主要试剂和仪器：2×TaqPCRMasterMix、研究表明,荚膜合成相关基因能通过猪链球菌菌群水平转移[8]。因此,对SS2噬菌体的研究,有助于解D2000DNAMarker、RNaseI、蛋
6、白酶K、割胶回收决噬菌体介导的毒力因子和猪链球菌遗传进化等方试剂盒均购自北京天为时代科技有限公司;pMD18-T面的问题。载体购自大连宝生生物工程有限公司;丝裂霉素C购基金项目:国家“973项目”(2006CB504403);国家自然科学基金(30771605)*通讯作者。Tel/Fax:+86-25-84396517;E-mail:lucp@njau.edu.cn作者简介:马玉玲(1977−),女,新疆伊犁人,博士,研究方向为兽医微生物学与免疫学。E-mail:yulingm@126.com收
7、稿日期:2007-10-24;修回日期:2007-12-16马玉玲等：溶原性噬菌体在猪链球菌2型分离株中的检出和鉴定./微生物学报(2008)48(4)509自阿敏生物公司;THB培养基、琼脂糖及琼脂粉购自CaCl2至终浓度1mol/L,混合均匀后浇注在底层平上海生工生物工程有限公司。板上,室温放置30min后倒置于37℃培养箱培养1.2引物设计10~12h,观察噬菌斑。根据GenBank上公布的猪链球菌89/1591株的噬1.6电镜观察菌体整合酶(phageintegrase)基因序列,利用在
8、噬菌体滤液中加入DNaseⅠ和RNaseA至终Primer5.0软件设计一对引物,设计的引物序列如下:浓度均为1μg/mL,室温温浴30min,消化裂解后释放P1:5′-GCTGGAGTCTTTGTTTGGTC-3′,P2:5′-GG-出的核酸,防止噬菌体颗粒被宿主菌核酸黏性溶液TTATGCAGAAAGACTTGG-3′。引物由上海生工生物带走。加入氯化钠至终浓度为1mol/L,冰浴1h,以促工程有限公司合成。进噬菌体颗粒与细胞碎片之间的分离;4℃11000×g1.3噬菌体整合酶基因的克隆和序列
