水禽空肠弯曲菌流行病学及分离株的多位点序列分型分析

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1、张弓：水禽空肠弯曲菌流行病学及分离株的多位点序列分型分析水禽空肠弯曲菌流行病学及分离株的多位点序列分型分析研究生：张弓导师：焦新安教授黄金林副教授中文摘要弯曲菌(Campylobacter)是全球范围内最常见的细菌性肠道病原菌，对人类致病的主要是空肠弯曲菌和结肠弯曲菌，能引起散发性和地方流行性的胃肠炎暴发，由其引起的弯曲菌病病例在世界各地普遍呈上升趋势。弯曲菌广泛存在于家禽家畜的肠道和自然环境中，水禽是导致人弯曲菌感染的潜在宿主，感染的动物通常无明显病症，但可长期向外界排菌，通过排泄物污染食物和饮水，引起人类及其它动物感染。因此，

2、控制或清除水禽弯曲菌是预防和控制人弯曲菌感染的重要前提之一。本文研究的主要目的是：(1)较为系统地调查与分析水禽中弯曲菌的流行现状与特点，对分离株进行耐药性分析。(2)通过构建重组标签空肠弯曲菌分析弯曲菌在水禽和家禽之间可能的传播途径。(3)应用多位点序列分型技术(Multilocussequencetyping，MLST)对不同源空肠弯曲菌分离株进行分子分型研究，探究菌株间的分子流行病学特征及种群结构。一、水禽弯曲菌流行现状和耐药性调查与分析2007年12月至2009年12月，采集江苏部分地区的鹅源、鸭源和江苏、山东、安徽鸡群样

3、品进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行病学调查。15个水禽群体中，空肠弯曲菌阳性的有12个、阳性率为80．O％，结肠弯曲菌阳性的有7个、阳性率为53．33％。在2182份水禽泄殖腔棉拭样品中，共检测出380份空肠弯曲菌阳性、阳性率为17．42％，16份结肠弯曲菌阳性、阳性率为0．73％，其中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌混合感染的样品为6份，阳性率为0．27％。其中，在850份鹅泄殖腔棉拭样品中，空肠弯曲菌平均阳性率为34．94％、结肠弯曲菌平均阳性率为0．82％；在1332份鸭群泄殖腔棉拭样品中，空肠弯曲菌阳性率为6．23％、结肠弯曲菌阳性率

4、为0．68％。不同水禽群感染率悬殊较大，空肠弯曲菌阳性率从0到65．52％、结肠弯曲菌阳性率从0到1．85％。数据分析显示，鹅群空肠弯曲菌感染率极显著高于鸭群感染率(p<0．01)，活禽市场鹅群感染率显著高于养殖场中鹅群感染率(p

5、鸭子泄殖腔的检测结果显示，鸡鸭混合养殖组中的鸭子首先被重组标签空肠弯曲菌感染，鸭子感染的数量一直呈现上升的趋势，其它组鸭子(除空白组之外)均在第6天被重组空肠弯曲菌感染，感染的数量也呈现一种上升的趋势。在第18天的检测结果中，经粪便传播和鸡鸭混合养殖的两组均有超过一半的鸭子被感染，其它两组也有一半的鸭子被感染。鸡、鸭混合养殖组中，鸭子首先被空肠弯曲菌感染，泄殖腔排菌量约为1250CFU／只，并在第6天达到最高排菌量，约为4000CFU／只，其它三组鸭子也均在第6天达到最高排菌量。之后随着时间的推移，各组鸭子排菌量保持水平趋势。研究

6、表明，水禽与鸡之间的空肠弯曲菌以多种途径进行传播，呈现多样化和复杂化，但主要以消化道传播为主。同时，鸡群周围的粪便、饲料和水以及环境中的空气粉尘均对水禽的感染具有重要影响。不同禽群的分开养殖以及保持良好的养殖环境卫生将有助于降低弯曲菌感染传播。三、不同源空肠弯曲菌分离株多位点序列分型研究选取空肠弯曲菌7个管家基因aspA、glnA、gltA、glyA、pgm、砌、uncA，对不同来源的167株空肠弯曲菌分离株和2株标准株进行多位点序列分型研究。结果表明，167株分离株共分成94种不同的序列型，分属18种同源复合体和独特型。有60株

7、细菌分属45个新序列型，其中，20株细菌存在新等位基因序列，新等位基因序列的数量分别为aspA(n=3)、g／nA(n=5)、gltA(n=5)、glyA(n=2)、pgm(n=1)、tkt(n=6)，uncA中没有新等位基因序列。等位基因数量最多的是glnA(n=26)，最少的是uncA(n=l1)。94种不同的序列型中，属于ST-353同源复合体的序列型有9种，占总序列型的9．57％，ST-21、ST-45、ST-52和ST-692同源复合体各包含6种序列型，分别占总序列型的6．38％。另外，属于独特型的序列型共27种，占总序

8、列型的28．72％。包含菌株数最多的同源复合体是ST．353，共有20株，占总分离株的12．O％，其次为ST-354同源复合体和ST-45同源复合体。具有同源复合体的菌株占总数的76．6％，属于独特型的细菌占总分离株的23．4％。含菌株数排前8位的