《FCM样品制备》PPT课件

《《FCM样品制备》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、FCM的样品制备IntroductionContent:1单分散细胞悬液制备技术2细胞生物学特征标记技术3荧光染色技术Source:1实体组织2血液3脱落细胞4单层培养细胞Introduction实体组织单分散细胞的制备Categorization:1新鲜实体组织2石蜡包埋组织实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织Definition:新鲜实体组织是手术或活检后根据检测目的而采用样品，此样品应及时进行适当的保存处理，如及时用固定剂或实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织Definition:低温对组织进行保存，以避免由于室温过高、放置间过长而造成组织自溶，影响检测结果实体组织单分散细胞的制备新鲜

2、实体组织Method:酶消化法机械法化学试剂处理法实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法protocol1将适合于酶消化的组织置于离心管中2将选好的酶溶液1-2ml加入盛有消化组织的试管中实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法protocol3一般消化20-30min(恒温37ºC或室温)，消化期间要间断振荡或吹打4终止消化，收集细胞悬液，以尼龙网(200目)过滤，除去大团块，以低速离心除去细胞碎片实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法protocol5将制备好的单细胞进行流式细胞术分析或保存实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法principle1可以破坏组织间的胶

3、原2可以水解组织细胞的紧密连结装置的蛋白性物质3可以水解组织间的粘多糖物质实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法enzyme1蛋白酶类如胃蛋白酶，木瓜蛋白酶，链蛋白酶和中性蛋白酶等)都能够所有组织中的细胞2胰酶能水解脂键和肽键实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法enzyme3胶原酶能降解几种分子类型的胶原4溶菌酶能水解糖蛋白和肽的糖苷键实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法enzyme5弹性蛋白酶能消化连接组织的糖蛋白和弹性蛋白的纤维，可用于解离血管、心脏和肝脏的细胞实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法announcements1酶需要溶解于适当的溶液中，而这种溶

4、液不致于造成酶效价降低2注意组织在消化液中的消化时间实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法announcements3注意酶活性的PH值如胃蛋白酶在碱性环境中失去活性，胰酶在中性溶剂中活性不佳4注意酶的适用浓度实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织酶消化法announcements5随时注意影响酶活性的其他因素6免疫标记实验时，酶处理可能改变细胞膜的成分，从而影响细胞亚群的区分实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织Method:酶消化法机械法化学试剂处理法实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法review机械法分裂实体组织包括：用剪刀剪碎或用锋利的解剖刀剁碎，用匀浆器匀浆，用细注射针头

5、抽吸细胞或细胞器悬液以分散细胞实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法review采用网搓法同样也能获得大量的细胞，机械法易造成细胞悬液中细胞碎片和细胞团块，所以机械法常与其他方法配合使用实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法剪碎法网搓法研磨法实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法剪碎法protocol将组织块放入平皿中，加入少量的盐水用剪刀将组织剪至匀浆，加入100mlNS2用吸管吸取组织匀浆，先以100目尼龙网过滤到试管中实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法剪碎法protocol3离心沉淀1000rpm3-5min，再用NS洗三次，每次以短时低速离心沉淀(500-800r

6、pm)去除细胞碎片实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法剪碎法protocol4以300目尼龙网过滤除去细胞团块570%冰乙醇固定，放入0-4℃冰箱实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法剪碎法网搓法研磨法实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法网搓法protocol将100目，300目尼龙网扎在小烧杯上实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法网搓法protocol2把剪碎的组织放在网上，以眼科镊子轻轻搓组织块，边搓边用NS冲洗，直到将组织搓完实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法网搓法protocol3收集细胞悬液，离心沉淀500-800rpm，2min470%乙醇固定，置0

7、-4℃冰箱备用实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法网搓法实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法剪碎法网搓法研磨法实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法研磨法protocol1将组织剪至小块放入组织研磨器中，加入1-2mlNS3转动研棒，研至匀浆即可实体组织单分散细胞的制备新鲜实体组织机械法研磨法protocol4加入NS10-20ml，冲洗研器收集细胞悬液，并经300目尼龙网过滤，离心沉淀500