SPA的表达、制备和鉴定

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1、目录【摘要】2【关键字】21．前言：21．1背景21．1．1金黄色葡萄球菌蛋白A(StaphylococcalproteinA，SPA)21．1．2大肠杆菌41．1．3SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）41．1．4westernblotting（Western免疫印迹）41．2目的51．3原理51．3．1SPA的原核表达51．3．2蛋白的提取61．3．3SDS-PAGE71．3．4westernblotting（Western免疫印迹）82．材料与方法：92．1材料：92．2方

2、法：92．2．1SPA的原核表达92．2．2蛋白质的提取112．2．3SDS-PAGE112．2．4westernblotting14小结与心得体会16参考文献1617【摘要】构建携带StaphylococcalproteinA(SPA)基因的原核表达载体，诱导表达具有活性的SPA。然后再通过westernblotting，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。【关键字】SPA，大肠杆菌，SDS-PAGE，westernblotting1．前言：1．1背景1．1．1

3、金黄色葡萄球菌蛋白A(StaphylococcalproteinA，SPA)金黄色葡萄球菌细胞壁的成分占整个细胞壁蛋白的6.7％，通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。SPA能与人及多种哺乳动物血清IgG中的Fc片段结合，但亲和性各不相同。此外，其还能与血清中少量的IgM和IgA结合[1]ShpigelE，GoldlustA，etal，Expression，purificationandapplicationsofstaphylococcalProteinAfusedtocellulose-bindin

4、gdomain[J]．BiotechnolApplBiochem，2000，31：197－203．。因此已广泛的应用于IG亚类的检测和分离纯化，酶的固定化及各类生物分子的检测等。SPA还能部分去除肿瘤患者和带瘤动物血清中的封闭抗体，从而降低血清对淋巴细胞介导的细胞毒的封闭作用。由于SPA的一些特殊的免疫学特性，引起广大免疫学者的关注，并逐渐发展成为免疫学上一种极为有用的工具。近年来，有关SPA分泌型融合体系的构建已日趋完善，并已广泛用来在细胞中表达、纯化异源基因的产物[2]李平，邱平．金黄色葡萄球

5、菌蛋白A分泌型融合表达系统[J]．生物工程进展，1994，14（1）：31－34．[3]VollenkleC，WeigertS，IlkN，etal．ConstructionofafunctionalSlayerfusionproteincomprisinganimmunoglobulinG-bindingdomainfordevelopmentofspecificadsorbentsforextracorporealbloodpurification[J]．ApplEnvironMicrobiol

6、，2004，70（3）：1514－1521。SPA的生物学特性[4]http://www.5ibio.com/html/immunology/mianyixibaohuaxue/20061113/1961.html生物实验网1．免疫原性与过敏原性SPA做为免疫原能刺激免疫活性细胞合成Ig，又能与其相应抗体的Fab段结合呈现抗原抗体的特异性反应。SPA－IgG注射家兔皮下可引起Arthus样反应，还可引起豚鼠的迟发性超敏反应。SPA体外试验，能刺激豚鼠离体回肠收缩。2．抗吞噬作用由于IgG的Fc段结

7、合点既是lgG调理活性结合点，又是SPA反应点。因此，SPA可与吞噬细胞竞争，结果抑制了多形核白细胞的吞噬作用，也可能是SPA阻断调理素与吞噬细胞作用的结果。3．固定补体SPA－IgG17和免疫复合物一样可以固定人和某些动物(如豚鼠、猪、狗等)血清中的补体，主要是通过补体传统激活途径。4．促有丝分裂因子SPA是一种B细胞激活剂，固相SPA作用明显，并不需要T细胞辅助,可容性SPA作用微弱，必须有T细胞参与。5．去封闭作用固相SPA能部分去除肿瘤病人和带瘤动物血清中的封闭活性，从而降低了血清对淋巴细

8、胞介导的细胞毒的封闭作用。SPA的应用[5]http://www.5ibio.com/html/immunology/mianyixibaohuaxue/20061113/1961.html生物实验网1．SPA菌的协同凝集作用用已知的标准血清，吸附到SPA菌的表面,使之成为吸附抗体的载体,再以此去诊断相应的未知抗原而产生肉眼可见的凝集颗粒,诊断的抗原可以是颗粒性的,也可以是可溶性的。此种凝集相当于反向间接血凝,但省去间接血凝中的抗体纯化,红血球鞣化等复杂手续,而只需要SPA菌体及粗