小鼠胸腺增龄相关新分子IH1的功能研究——参与NFκB细胞信号转导

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1、中国协和医科大学硕士学位论文小鼠胸腺增龄相关新分子IH1的功能研究——参与NF-κB细胞信号转导姓名：刘世荣申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：何维;崔莲仙20060601中国协和医科大学硕士学位论文中文摘要小鼠胸腺增龄性相关新分子IHl的功能研究一参与NF．KB细胞信号转导研究生：刘世荣导师：何维教授崔莲仙教授胸腺增龄性退化与萎缩是机体老化过程中最重要的免疫系统表现之一，是决定和制约免疫系统老化的关键环节。然而，有关胸腺萎缩的调控机制尚未完全明了。近年研究表明，胸腺萎缩过程伴随着基因表达的

2、改变，基因表型不同的个体其胸腺萎缩的速度和程度存在明显的差异。因此，胸腺萎缩是一个受遗传基因调控的过程。本课题组在前期研究中，利用差异显示技术，获得了4条在老龄鼠和幼龄鼠差异表达的基因，并初步探索了其中一条基因IHl的作用分子。经酵母双杂交、免疫共沉淀和PuLL—DowN等实验，结果提示，IHl分子可能是个信号分子，参与细胞信号转导。经NF—xB介导的信号转导是最重要的细胞信号转导通路之一，它在细胞增殖和凋亡、免疫应答、肿瘤发生、心血管疾病和神经系统发育中均起着重要作用。本研究旨在探索IHl与N

3、F．KB细胞信号转导的关系，并开展了下述工作：一是构建了IHl原核表达载体，表达并纯化了IHl蛋白，制备了抗I川单克隆抗体；二是构建了IHl真核表达载体，转染了EL4细胞，使之过表达IHl分子；三是设计合成了IHlsiRNA，并对EL4细胞进行了RNA干扰实验。本研究发现，IHl过表达能显著提高IL-1p刺激所引起的NF—KB活化，而IHl基因表达的沉默则显著降低IL-lB刺激所引起的NF一1cB活化。同时，我们用激光共聚焦显微技术对细胞内IHl分子的分布和IHl与RAcKl、ubB及NEDD8

4、分子的共定位进行研究，发现IHl分子主要分布于胞浆中，能与RACKl、ubB及NEDD8分子共同定位。综上，我们认为IHl分子参与了NF—KB细胞信号转导，其机制可能是在胞浆中通过与RAcKl、ubB及NEDD8分子的直接相互作用介导的。关键词：老化免疫，胸腺萎缩，新基因IHl，单克隆抗体，NF—xB，信号转导中国协和医科大学硕士学位论文ABSTRACTFunctionalstudyofaNoVelMurineThymusAgingRelatedGeneIHl—PossiblyParticipa

5、tesinNF-KBSignaIingM．S．Candidate：ShirongLiuMentor：W拼He，LianxianCuiThedeteriorationoftheimmunesystemwithpm掣essiVeagingisbelievedtocontributetomorbidi母andmortalityinelderlyhumansduetotlleincreasedincidenceofinfection，autoimmunitya11dcanceLOneofmeconseq

6、uencesofanagingimmunesystemistheprocesste肌edthymicinVolution．Ho、VeVer，themechanismofthymicinvolutionisunclearso白：StudiesoVerthelastdecadeindicated廿latthegeneticbac埏mundofmammalmightplayanimportantmIeindete丌niningage—relatedalterationsinthymicinvoluti

7、on．Therefore，itisassumedt11atthymicinVolutionwouldbecontmlledbythehercdi吼whilethealteredexpressionofthegenesinthymusmightcontributetothymicinvolution．WehadpreViouslyident湎edfourmurinethymusagingrelatedgcncs，oneofⅥ，hichn锄edIHl．BioinfonnaticsandpreViou

8、sstudiesindicatethatIHlmightplayamleincellularsignaltr柚sduction．NF．1cBsignalingisoneofthemostcommonsignalingpathwaysofthebody．ItregulatesaVarietyofgenesimportantforimmunjtya11dinnammationresponses，deVelopmentalprocesses，cellulargrowth，andapoptosis．In