《血红蛋白提取》ppt课件

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1、课题3血红蛋白的提取和分离2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成这标志着进入了后基因组时代。人类基因组：指DNA分子所携带的全部遗传信息。蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。主要是对蛋白质功能的研究思考1分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。思考2蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。思考3高温灭菌和酒精灭菌分别

2、利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构思考4人们用鸡的红细胞提取DNA，用人(猪、牛、羊）的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。一、基础知识：㈠凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）2、概念：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。

3、3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。4、具体过程相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡缓冲溶液：2、作用：能够抵制（）对溶液的（）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱PH值3、缓冲

4、溶液的配制通常由（）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（）就可以制得（）使用的缓冲液。1－2使用比例在不同PH范围内思考：说出人体血液中缓冲对。NaH2PO4/Na2HPO4H2CO3/NaHCO3㈢电泳：1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。思考：在血红蛋白的提取和分离实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）2、原理：许多重要的生物大分子，如（）等都具有()在()下，

5、这些基团会带上（）。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其（）移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（）以及分子本身（）、（）的不同使带电分子产生不同的（），从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小形状迁移速度一定的PH聚丙稀酰胺凝胶：是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在引发剂(过硫酸铵和催化剂（四甲基已二胺）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。测定（）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳

6、蛋白质相对分子质量二实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：1.样品处理血液血浆水分固体物质血浆蛋白无机盐磷脂葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞（最多）血红蛋白（）两个a－肽链两个β一肽链样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定共四条肽链90％①目的：去除（）②方法：（）离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果），然后用胶头吸管吸出上层透明的（），将下层（）的红细胞液体倒入（）每个肽链环绕（），此基团可携带（）。血红蛋白因含有（）而呈红色。本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分

7、离血红蛋白。一个亚铁血红素基团一分子氧或一分子二氧化碳血红素(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色烧杯再加入用（）的（）质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤⑤低速离心（低速短时间）⑥重复4、5步骤（）次，直至上清液中已没有（），表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。五倍体积生理盐水三黄色(2)血红蛋白的释放加（）到（）体积，再加40％体积的（）（溶解细胞膜），置于（）上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白.(3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好混合液转移到离心管内，

8、以2000r/min的速度离心10min，试管中的溶液分为4层:原血液甲苯磁力搅拌器蒸馏水第1层（最上层）：（）甲苯层第2层（中上层）：（）的沉淀层，（）色薄层固体第3层（中下层）：（）的水溶液层（）的液体第4层（最下层）：其它杂质（）的沉淀层无色透明脂溶性物质白血红蛋白红色透明暗红色用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。取()ml的血红蛋白溶液