学年创新实验总结报告

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1、2002学年创新实验总结报告手性药物去甲肾上腺素对映体的高效毛细管电泳-电化学分离检测报告人：许迪明指导教师:谢天尧手性药物去甲肾上腺素对映体的毛细管电泳-电化学分离检测摘要：本文报道了以未涂层融硅石英毛细管（50cm×75µm）为分离柱，5mmol/LNaOH+8mmol/LCitricacid+8mmol/Lb-CD为电泳介质，分离电压12.5KV，检测电压0.80V，建立的去甲肾上腺素对映体高效毛细管电泳-方波安培分离检测方法。对分离过程中使用的缓冲溶液种类、浓度、pH、分离电压对拆分效果的影响进行了讨论，并对拆分机理进行了探讨。手性药物在医学领域中的作用越来越被人们重视。在含

2、有对映异构体的药物中，一种异构体是药物的有效组分，而另一种则可能低效，无效乃至有毒，所以美国食品与药物管理局出台了手性药物的管理法规，并引起国际上对手性药物分离分析的重视（1）。手性化合物分离检测的常用方法有高效液相色谱（HPLC），气相色谱（GC），超临界流体（SFC）和毛细管电泳（CE）。近年来，毛细管电泳手性分离技术引起了人们的重视，并得到了快速发展。概述部分目前，有关采用毛细管电泳分离手性药物报道中以光学检测为多，电化学检测的应用很少。毛细管电泳—电化学检测，尤其是安培检测，可使用极细孔径的毛细管而不会造成灵敏度的损失，具有灵敏度高、线性范围宽、设备简单价廉、易于微机化和微型

3、化，而被认为是CE的极具潜力的检测方法。近年来随着制约其应用的关键技术的突破，其应用潜能正在得到发挥，与其它类型的检测器相比，具有自身的特点和优势，已发展成为一种重要的分离分析方法，将在手性药物拆分方面有较大的应用前景。概述部分去甲肾上腺素(Noradrenaline)是一种急救药，具有很强的血管收缩作用，使全身小动脉与小静脉都收缩(但冠状血管扩张)，外周阻力增高，血压上升。临床上主要利用它的升压作用，静滴用于各种休克(但出血性休克禁用)，以提高血压，保证对重要器官(如脑)的血液供应。，结构式见图1。去甲肾上腺素是手性分子，含R型和S型。本文首次采用高效毛细管电泳—方波安培检测法，以

4、5mmol/LNaOH+8mmol/LCitricacid+8mmol/Lb-CD为电泳介质，实现了去甲肾上腺素对映体的分离检测，取得了满意的结果。概述部分去甲肾上腺素分子结构图图1去甲肾上腺素的分子结构Fig.1StructureofNoradrenaline1.主要仪器和试剂CES2000毛细管电泳仪（高压电源，安培检测器，毛细管电泳数据工作站，中山大学化学与化工学院研制）；PHS-3C型酸度计（上海伟业仪器厂）；石英毛细管（50cm×75µmi.d.,河北永年光导纤维厂）。CQ-2B型超声波清洗器（明珠电器有限公司）。去甲肾上腺素（上海禾丰制药公司产品）；b-CD（中国医药集团

5、上海化学试剂公司产品）；氢氧化钠（广州化学试剂厂）；柠檬酸（Citricacid,广州化学试剂厂）；所用试剂均为分析纯，水为二次石英重蒸水。实验部分2.缓冲液和样品溶液分别配制100mmol/L柠檬酸、氢氧化钠；25mmol/Lb-CD储备液。实验时，按要求量取适量储备液制得不同浓度和不同pH的电泳运行缓冲液。去甲肾上腺素对映体配成2mg/mL的储备液，进样时用缓冲溶液稀释到所需浓度。实验部分3.实验方法连接好毛细管电泳仪和检测装置，毛细管柱在使用前依次用0.1mol/LNaOH，蒸馏水和运行液各冲洗约5min。检测电极用超声波进行冲洗。当更换运行液或进样4次以后，也需按上述步骤清洗

6、毛细管和电极。进样方式采用重力进样，要求进样端与检测端的高度差为20cm，进样时间为10s。方波安培检测器的输出信号经数据工作站采集到微机中，进行实时数据处理、图形显示和数据文件存储。实验在恒温（25˚C），恒湿（70%）的实验条件下进行。实验部分3.1b-CD浓度的影响b-CD是手性选择剂，是对映体分离的主要因素，它的浓度直接决定了分离效果，不同浓度的b-CD对两个对映体分离的分离效果不同。高浓度和低浓度的b-CD对手性分离的机理也有变化。高浓度的b-CD由于非特异性疏水作用和b-CD的二聚作用导致手性识别能力。低浓度的b-CD与两对映体的作用互相竞争。b-CD的浓度也影响了底液的

7、性质，使毛细管电泳的推动力电渗流产生变化，改变了对映体的分离性。3.结果与讨论1b-CD浓度的影响实验也证明了这一点，图2－A是b-CD的时浓度为4mmol/L时的分离效果图，可以看出两个对映体还没有明显分开；图2－B是b-CD的时浓度为8mmol/L时的分离效果图，此时的分离效果比较满意；图2－C是b-CD的时浓度为12mmol/L时的分离的效果图，此时的分离效果基本满意。当b-CD浓度大于8mmol/L小于12mmol/L时，去甲肾上腺素对映体分别得到