不同基本培养基和激素对籼稻成熟胚愈伤组织诱导的影响

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1、不同基本培养基和激素对籼稻成熟胚愈伤组织诱导的影响摘要：以川香２９ｂ、中９ｂ、金２３ｂ和ⅱ－３２ｂ４种籼稻的成熟胚为外植体，研究ｍｓ、ｎ６、ｎｂ和ｎｍｂ４种基本培养基，２，４－ｄ与ｋｔ或６－ｂａ联合使用对籼稻愈伤组织诱导的影响。结果表明，４种籼稻在ｎｍｂ基本培养基中愈伤组织的诱导率最高，平均诱导率为７７.00％～９６.00％，其中在ｎｍｂ中的诱导效果最好，在４种不同基本培养基中愈伤组织总平均诱导率的高低顺序依次为川香２９ｂ、中９ｂ、ⅱ－３２ｂ、金２３ｂ。当３．０ｍｇ／ｌ２，４－ｄ与不同浓度的ｋｔ或６－ｂａ联合使用时，ｋｔ浓度为０．１ｍｇ／ｌ时，川香２９ｂ和中９

2、ｂ愈伤组织诱导率高；对于ⅱ－３２ｂ，ｋｔ浓度为０．６ｍｇ／ｌ愈伤组织诱导率较高；６－ｂａ浓度为０．４ｍｇ／ｌ时，川香２９ｂ愈伤组织诱导率最高；对于中９ｂ和ⅱ－３２ｂ，添加０．１ｍｇ／ｌ的６－ｂａ最有利于愈伤组织的诱导；而对于金２３ｂ，无论是添加ｋｔ或６－ｂａ都会抑制愈伤组织的诱导。关键词：籼稻；愈伤组织诱导；培养基；激素ａｂｓｔｒａｃｔ：ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｏｕｒｂａｓａｌｍｅｄｉum（ｍｓ，ｎ６，ｎｂａｎｄｎｍｂ）ａｎｄｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆｐｈｙｔｏｋｉｎｉｎ（ｋｔ，６－ｂａ）ｏｎｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｆｒｏｍｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｓｏｆｆｏｕｒｉ

3、ｎｄｉｃａｒｉｃｅｖａｒｉｅｔｉｅｓ（ｃｈｕａｎｘｉａｎｇ２９ｂ，ｚｈｏｎｇ９ｂ，ｊｉｎ２３ｂ，ⅱ－３２ｂ）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｓｔｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂａｓａｌｍｅｄｉｕｍｗａｓｎｍｂａｓｔｈｅａｖｅｒａｇｅｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ７７.00％ｔｏ９６.00％．ｔｈｅｏｒｄｅｒｏｆａｖｅｒａｇｅｒａｔｅｆｒｏｍｈｉｇｈｔｏｌｏｗｗａｓｃｈｕａｎｘｉａｎｇ２９ｂ，ｚｈｏｎｇ９ｂ，ⅱ－３２ｂ，ｊｉｎ２３ｂ．ｗｈｅｎ３ｍｇ／ｌ２，４－ｄｗａｓａｐｐｌｉｅｄｗｉｔｈ０．

4、１ｍｇ／ｌｋｔｏｒ０．４ｍｇ／ｌ６－ｂａ，ｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｃｈｕａｎｇｘｉａｎｇ２９ｂｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ．ｆｏｒｚｈｏｎｇ９ｂ，ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆ３ｍｇ／ｌ２，４－ｄｗｉｔｈ０．１ｍｇ／ｌｋｔｏｒ０．１ｍｇ／ｌ６－ｂａｗａｓｏｐｔｉｍｕｍ．ｆｏｒⅱ－３２ｂ，ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆ３ｍｇ／ｌ２，４－ｄｗｉｔｈ０．６ｍｇ／ｌｋｔｏｒ０．１ｍｇ／ｌ６－ｂａｗａｓｏｐｔｉｍｕｍ．ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｃａｌｌｕｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｊｉｎ２３ｂｗｏｕｌｄbeｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙａｄｄｉｎｇｅｉｔｈｅｒ６－ｂａｏｒ

5、ｋｔ．ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｉｎｄｉｃａｒｉｃｅ；ｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；ｂａｓａｌｍｅｄｉum；ｐｈｙｔｏｋｉｎｉｎ农杆菌介导的高效遗传转化体系已经在水稻外源基因转化中取得了很大的成功［１－３］，利用该技术不仅可以把感兴趣的基因导入到水稻基因组中，进而培育优质、高产、多抗的水稻新品种［４，５］，而且也为水稻基因功能研究提供重要手段，如通过ｔ－ｄｎａ插入构建突变体库、基因打靶等［６，７］。水稻胚性愈伤组织是农杆菌介导外源基因进行遗传转化的良好受体，因此水稻愈伤组织的形成和状态是直接影响着水稻遗传转化效率的重要因素。籼稻和粳稻是栽培稻的两个主要亚种，粳稻的组

6、织培养技术已经成熟，愈伤组织诱导容易，诱导出来的愈伤组织是胚性愈伤组织，生长速度快，再生率高，并且许多粳稻品种已建立了基于愈伤组织的重复性好、转化频率高的遗传转化体系［８，９］。而栽培面积占全球水稻８０％的籼稻却具有不良的组织培养特性，其诱导率和再生率都比粳稻低得多，后续继代过程中容易褐化，且不同品种籼稻之间组织培养特性差别很大［１０，１１］，使得籼稻遗传转化效率低，甚至难以进行转化，这样极大地阻碍了籼稻遗传转化的发展。水稻成熟胚由于具有取材容易、不受季节限制、操作简单等优点是获得愈伤组织较好的外植体。籼稻成熟胚愈伤组织诱导率和质量除与基因型及外植体有关外，外

7、源激素浓度、培养基成分也是重要的影响因素。一些研究表明在籼稻愈伤组织诱导中适当改变培养基成分、调节外源激素浓度及其配比等可以在一定程度上提高愈伤组织诱导率和质量［１２－１４］。因此，研究４种不同基本培养基、不同浓度的ｋｔ、６－ｂａ对川香２９ｂ、中９ｂ、金２３ｂ、ⅱ－３２ｂ４种常用的籼型杂交水稻保持系成熟胚愈伤组织诱导的影响，以期提高籼稻愈伤组织的诱导率和质量，筛选出组织培养特性较好的籼稻品种，为籼稻基因工程和分子育种研究的进一步发展打下一定基础。１材料与方法１．１材料籼稻保持系中９ｂ、金２３ｂ、ⅱ－３２ｂ和川香２９ｂ种子由南昌大学江西省分子生物学基因工程重点实

8、验室提供。化学试剂均为国产分析纯，试验