检验核医学的技术进展与临床应用

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1、彭志平重庆医科大学检验核医学的技术进展与临床应用1放射免疫分析法1959美国Yalow&Berson1977获诺贝尔医学生物学奖医学生物学超微量分析的里程碑使人体内微量生物活性物质的测量成为可能对现代医学的发展起到推动作用2放射免疫（RIA）的优势集中了放射性核素示踪技术的高灵敏度和免疫发应的高特异性R：放射性核素示踪高灵敏（10-7分子/ml或-9~-15g/ml）不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号(标记物的放大效应)I：免疫学反应高特异以抗体为结合剂3采用放射性核素标记物为示踪剂，以特异性结合反应为基础，以放射性测量为定量手段，在体外对微量活性物质进行定量检测的一类分析技术。

2、放射性竞争结合分析放射免疫分析RIA放射性非竞争结合分析免疫放射分析IRMA概念-体外放射配体结合分析分类4体外放射配体结合分析优点灵敏度高特异性强放射性核素不引入体内应用范围广被测样品用量小操作简便易于自动化5现代医学的发展疾病诊断的革新可在没有任何临床症状，而病人体内发生1.基因表达异常2.受体分布异常或受体功能改变3.器官代谢异常4.激素水平异常酶、神经递质……等异常，可早期发现。体外分析和影像学的发展起了很大作用例如：癌症的早期诊断6待测物质浓度与检测手段临床化学分析10-1210-910-610-310-0pg/mLng/mLmg/mLmg/mLg/L放射免疫分析Therape

3、uticDrugsThyroidHormoneFertilityHormoneAllergyCancerMarkersInfectiousDiseaseVitaminsSerumProteins常量微量超微量7放射免疫分析RIA8基本原理竞争性结合的抑制反应非标记抗原（检测对象或标准品）标记抗原抗体限量标记和非标记抗原具有相同的免疫活性同时与限量的抗体进行免疫结合反应彼此竞争相互抑制9反应式**Ag+Ab*Ag-Ab+*Ag+Ag限量Ag-Ab+AgAg:待测抗原*Ag:标记抗原Ab:抗体Ag-Ab:抗原抗体复合物*Ag-Ab:标记抗原抗体复合物10B%标准曲线11基本试剂标准抗原即标准

4、品，与待测物具有相同的化学结构、免疫学活性标记抗原是RIA的示踪剂，125I，纯度高，合适的比活性，标记后抗原免疫活性不受破坏特异性抗体特异性高，滴度高，亲和力大分离试剂12分离方法第二抗体优点：特异性强，分离效果好，适合自动化。缺点：二抗用量大，成本高，两次温育，操作时间长双抗体法沉淀法吸附法固相法中性盐和有机溶剂硫酸钠，硫酸铵及聚乙二醇（PEG)等优点：来源容易，价格便宜，分离快速，不需二次温育。缺点：结果易受T，Ph，试剂浓度等因素影响。活性炭硅酸盐离子交换树脂优点：简单，快速，经济，材料来源广。缺点：专一性差，影响因素多免疫吸附法优点：固相材料来源广，价格低，分离不用离心，简单，

5、快速。缺点：制备固相试剂费时，费事；抗体活性的回收率低；大分子抗体与固相连接时会造成亲和力下降，灵敏度受影响13基本操作步骤加样温育分离放射性测量绘制标准曲线查待测物含量14RIA四十年的发展和挑战方法的更完善，灵敏度、精密度的提高，质量控制体系的完善，方法的简化在RIA的基础上，一大类新的测量方法的发展15免疫放射分析IRMA16基本原理抗原与特异性抗体间的特异性结合检测对象为抗原标记的是抗体，抗体过量标准抗原或待测抗原与抗体的结合不存在竞争非竞争性放射分析17双位点(夹心)固相免疫放射分析法18标准曲线19基本特点标记物为抗体，不影响抗原的免疫活性使用的是单克隆抗体，特异性明显提高单

6、克隆抗体为大分子物质，碘化标记抗体比抗原容易，产物比较稳定检测灵敏度较RIA高，且检测范围扩大操作更为简便、快速抗体用量大，成本较高仅适用于蛋白质类大分子物质的检测20新技术的挑战临床的发展和需要样品量的增大自动化程度的要求非放射性免疫分析方法的开发21不同标记物标记的免疫方法22几种重要的标记免疫分析方法方法名称英文缩写标记对象标记物分析对象放射免疫分析RIA抗原放射性同位素不限酶免疫分析EIA同上酶不限荧光免疫分析FIA同上荧光化合物不限化学发光免疫分析CLIA同上发光化合物不限脂质体染料包藏免疫分析抗原磺基罗丹明B不限免疫放射分析IRMA抗体放射性同位素大分子酶联免疫分析ELISA

7、抗体酶同上免疫荧光分析IFMA抗体荧光化合物同上免疫化学发光分析ICLMA抗体发光化合物同上23方法名称英文缩写标记对象标记物分析对象化学发光-荧光能量CLETIA抗原鲁米诺和荧光素激素药物/免疫分析小分子抗原联合酶给体免疫分析CEDLA抗原β-半乳糖苷酶片段同上酶监测免疫分析技术EMIA抗原G6PDH,MDH,溶菌酶同上均相发光免疫分析抗原鲁米诺同上均相酶抑制免疫分析抗原乙酰胆碱酯酶抑制剂同上荧光偏振免疫分析FPIA抗原荧光素同上