毕业论文--重楼属植物遗传多样性的RSAP标记

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1、重楼属植物遗传多样性的RSAP标记植物科学与技术2007级李衣伍指导老师田孟良副教授摘要：研究重楼属植物DNA指纹图谱，初步探讨RSAP分子标记技术在重楼属植物遗传多样性研究上的应用。采用限制性位点扩增多态性(restrictionsiteamplificationpolymorphism，RSAP)技术对重楼属8个种进行基因组DNA多态性分析。用10条RSAP引物即选出18对引物组合构建了8个种的DNA指纹图谱。通过遗传距离构建系统进化树，重楼属8个种的进化关系得到了很好的分辨。RSAP标记能够对重楼属植物进行准确的分子鉴定,为重楼属中药材的种类鉴定和种间的

2、分类地位提供分子生物学依据。关键字：重楼，RSAP，PAGE，聚类分析GeneticDiversityAnalysisofParisbyRSAPMakersLIYi-wuPlantScienceandTechnologyGrade2007DirectedbyTIANMENGLIANGAssociateProfessorAbstract:StudiesonDNAfingerprintingof8parisandapplicationofrestrictionsiteamplificationpolymorphism(RSAP)totheidentificatio

3、nofParis.Sequence—relatedamplifiedpolymorphism(SRAP)molecularmarkerswereusedtodetectthegeneticdiversityof7accessionsofPariscollectedfromTianQuanandBaoXinginSichuan，andonefromLiJianginYunNan.TheDNAfingerprintingof8speciesweregeneratedby18primercombinationscreenedfrom45primercombinati

4、ons.8accessionswereclusteredinto4groupsbygeneticdistance.BasedonmolecularbiologymethodsofRSAPanalysis,accuratemolecularidentificationcouldbeperformedontraditionalChinesemedicinalmaterialplantsinParis,andprovidedmolecularevidencefortaxonomyandidentificationofdifferentspeciesinParis.K

5、eywords：Paris，RSAP，PAGE，clustering重楼属（Paris）植物为多年生草木，隶属于延龄草科（Trillaceae）9，全世界重楼属共24个种，分布在远东地区的热带及温带地区，我国有19种，以西南各省区居多。重楼根茎匍匐状，茎单生，直立。叶4至多枚轮生，极少3，具叶柄，披针形到卵形，基部具3条主脉，为网状脉。花单生于叶轮之上，花被和雄蕊4数或更多，又名灯台七、王孙、蚤休、七叶一枝花等[1]，含蚤休甙、蚤休士宁甙、生物碱、氨基酸等。对流感病毒有较强的抑制作用，对痢疾杆菌、副伤寒杆菌、沙门氏菌、副大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血

6、性链球菌、脑膜炎双球菌等有抑制作用。具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊的功效，用于疔疮痈肿，咽喉肿痛，蛇虫咬伤，跌扑伤痛，惊风抽搐[2]。该属植物分类学地位至今未有定论，不同种之间有的外部特征较相似，形态有重叠或交叉，容易混淆[3]。近年来,近年来被广泛用于许多中成药和新药的制作。随着药物工厂化生产的发展,重楼被乱采滥掘,再加之不注意其保护和繁育,重楼自然资源面临着逐渐枯竭的危险。因此,无论是从药用植物种质资源的保存,还是从重楼植物资源的可持续利用来说,都需对重楼的遗传多样性作更深一步的探讨。商品重楼需求量增大,野生资源急剧减少,商品药材基原混乱,药材品质不一,

7、寻找鉴定重楼药材的有效方法迫在眉睫[4]。相关序列扩增多态性(sequence-relatedamplifiedpolymorphism，SRAP)是由美国加州大学蔬菜作物系Li与Quiros【5】博士于2001年提出的。RSAP(restrictionsiteamplificationpolymorphism)即限制性位点扩增多态性,是通过简单PCR反应,针对基因组内普遍存在的酶切位点来产生多态性标记。其RSAP的引物是依据SRAP(sequencerelatedamplifiedpolymorphism)(序列相关扩增多态性)的引物设计原理建立。使用1对1

8、7-18个碱基组成的引物序列,5′端前