真菌染色_化学_自然科学_专业资料

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1、最近在看关于真菌的染色方面的资料，现在总结一下发出来，大家共同学习一下。一、背景介绍真菌属于真核生物，没有质体，营养方式为吸收，无吞噬作用。细胞壁含有甲壳质和P■葡聚糖。可引起人类，动物的疾病，称为真菌病，还可引起植物的疾病、人类过敏性疾病和真菌毒素小毒症。真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应川引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件.近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转

2、为致病真菌。因此，真菌感染已经成为一个口益严峻的问题。真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌：主耍侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。临床最多见的浅部真菌病冇：体癣、股癣、手癣和足癣。深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.；按生物学性状的不同乂分为：酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。深部真菌常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌，马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌，砲子菌丝等。真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型，单细胞真菌呈圆形或卵圆性，常见于酵付菌和酵母样菌；多细胞真菌多呈丝状，分枝交织成团，也称为丝状菌，即一般通

3、称为霉菌。由菌丝和砲子构成。砲了是真菌的生殖结构，分为冇性砲了和无性抱了。在适宜条件下，菌丝是由抱子生出芽管，逐渐延长呈丝状，生物学上把真菌的每i根细丝叫做菌丝。二、常用检查方法1、直接镜检：直接镜检的方法方便经济，可采用不染色的湿片如KOH涂片或乳酸酚棉蓝涂片。对浅农和皮下真菌感染最有帮助，一般在有菌部位发现大量真菌菌丝即可作出诊断,可在几分钟内完成，并H观察到的真菌形态可以捉供冇价值的临床信息。但是缺点在于阳性率较低，隐形结果也不能排除诊断。2、真菌的染色方法:①革兰染色：所有真菌真菌、放线菌均为革兰染色阳性，被染成蓝黑色。适用于酵母菌、抱子丝菌、组织胞浆菌及诺卡菌放线

4、菌的感染。②吉姆萨染色可用于骨髓涂片和其他标木中荚膜组织胞浆菌和马内菲青霉的检测。用吉姆萨染色必须要冇指控涂片。③PAS法：用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。操作方法：(1)切片脱蜡至水。⑵0.5%高碘酸氧化5・8分钟。(3)流水冲洗2分钟，再用蒸係水洗。⑷入无色品红液于暗处并加盖作用10・20分钟。(5)0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗2次，每次约1分钟。⑹流水冲洗5分钟。（7）0.2%亮绿水溶液复染。（8）稍水洗。（9）常规脱水透明封片.染色结果：真菌菌丝和抱了呈品红色，其他组织绿色P.S：无色品红液（Schiff氏试剂）的

5、试剂配制主要是试剂的纯度要高，才能配制出理想的无色品红液，染色才能成功。①六胺银法（GMS）:用倂酸氧化真菌壁的多糖而暴露岀醛基，醛基还原六胺银内的银离了为黑色的金属银而显色。操作方法：（1）切片脱蜡至水。⑵8%侪酸水溶液氧化20分钟，自來水稍洗。⑶0.5%偏重亚硫酸钠液处理1分钟，流水冲洗5分钟，再用蒸锚水洗2次。⑷浸入已预热（约15・30分钟）的六胺银工作液中分三种方式处理：①水浴锅内恒温处理（50・52°C）：先将已盛有六胺银工作液的5片装高身染色缸置入水浴锅内预热15・30分钟，再将处理好的玻片證入六胺银工作液屮反应30・60分钟，中途显微镜观察，至见到菌丝呈黑褐色

6、为止。②电热恒温箱内处理（58°C-60°C）：方法同上，在六胺银工作液中反应的时间较长需60・90分钟,蒸馆水稍洗.③微波炉滴染：収微波炉专用蒸盒，底放50ml水，用于吸热保湿；玻片放置隔层，滴加六胺银工作液于组织上，火力3档5-6分钟,蒸馅水稍洗.⑸滴加0.1%氯化金溶液调色2-3分钟，蒸懈水洗。⑹3%硫代硫酸钠液处理2-5分钟，流水冲洗5分钟。⑺用橙黄G复染1-2秒（首选）或用Mayer氏苏木素浅染，伊红复染。⑻常规脱水透明封片。2.染色结果：各种真菌均被着色，菌丝和砲了呈明显的黑褐色。背景为：橙黄色（橙黄G复染），红色（伊红复染）。P.S：六胺银染色是显示真菌效果最

7、佳的一种方法，为了获得菌体及背景清晰的染色效果，首先必须做好准备工作，染色过程需川的玻璃器皿要洁净，尽量避免使用过久的蒸饰水配制试剂,建议使用双蒸水，这样才能保证六胺银工作液的纯度，避免朵质沉淀影响观察。其次病理技术人员应学握常见真菌的一般形态特征，并根据实验室的具体情况选择合适的孵育条件，摸索孵冇时间和温度。在显微镜下观察染色程度时，低倍镜下颜色不要太黑，至深棕褐色即可,经0.1%氯化金溶液调色后，真菌从深棕褐色变成棕黑色，真菌壁和砲子着色。如若过染可用1%铁鼠化钾与2%硫代硫酸钠1:1混合备用，临用时将此混合液