清远市肿眼肉鸡病原诊断和药敏试验

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1、清远市肿眼肉鸡病原诊断和药敏试验清远市肿眼肉鸡病原诊断和药敏试验摘要：广东省清远地区3群肉鸡临床表现不同程度的肿眼、流鼻水等症状，临床治疗处理效果不理想。在3群病鸡中各取病鸡鼻窦腔分泌液进行细菌分离培养、革兰氏和瑞氏染色，并对分离菌株进行了玻片凝集和生化试验。结果表明，革兰氏染色呈阴性，瑞氏染色呈蓝色，油镜下可见细菌呈短杆菌或球杆菌，两极着色，3群分离株均与副鸡嗜血杆菌A型血清完全凝集反应，与E和C型血清无凝集反应,确定肿眼肉鸡病原为A型副鸡嗜血杆菌。同时选用多种药物研究了该病原菌的药敏性，结果显示，A型副鸡嗜血杆菌对头砲曝咲、氟苯尼考和

2、青霉素3种药物均表现极敏。关键词：副鸡嗜血杆菌；病原诊断；药敏试验中图分类号：S852.61文献标识码：A文章编号：0439-8114(2012)04-0782-03副鸡嗜血杆菌(Haemophilusparaga11inarum,HPG)是引起鸡上呼吸道疾病的一种致病菌，俗称鸡传染性鼻炎，以鼻腔和鼻窦发炎、流鼻汁、脸部肿胀和眼结膜炎为主要特征。1920年，Beach首先报道该病，Deb1iekc于1931年首次分离到了该病的病原菌［1］。本病呈世界性分布，主耍引起产蛋鸡的产蛋量下降，育成鸡的生长发育缓慢，给养禽业造成很大的经济损失。我国

3、从1980年起就有许多疑似该病的病例出现，冯文达［2］于1987年首先在北京分离到1株病原菌。2010年11月，广东省清远市某肉鸡养殖合作社3群肉鸡表现不同程度的肿眼、流鼻水症状，并有严重的呼吸道疾病，病鸡表现为精神沉郁、咳嗽、肿头等症状，鸡群经治疗处理，效果不理想，死淘较大，给肉鸡合作社农户造成较大的经济损失。笔者对这3群发病肉鸡的病原菌进行了分离鉴定，同时进行了药物敏感试验，旨在筛选出临床上有效治疗该致病菌株的敏感药物，为防治该病提供一定的参考。1材料与方法1.1材料病料采集于广东省清远市某肉鸡养殖合作社（3群，分群采集），副鸡嗜血杆

4、菌A、B、C3种血清型的阳性血清均购自中国兽医药品监察所；常规培养基、生化试剂和药敏纸片购于杭州天和微宇物试剂有限公司。1.2方法1・2.1细菌分离培养在无菌操作条件下，用棉拭了蘸取病鸡鼻窦腔内分泌物，划线接种于巧克力琼脂培养基，置于37£恒温箱烛缸培养24h,之后挑取单个菌落进行纯培养。分群采集，培养。1・2.2染色镜检挑取单个菌落进行革兰氏染色及瑞氏染色,在光学显微镜下观察细菌的形态特征。1・2.3血清学鉴定采用快速血清平板凝集试验方法，取所分离纯培养的各菌株分别与副鸡嗜血杆菌的A、B、C3种血清型的阳性血清分别进行玻片凝集试验。1.

5、2.4生化试验对所分离的3株病原菌进行葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖发酵试验，并进行接触酶、U引味试验、硝酸盐还原试验及H2S试验等生化指标的测定。1.2.5药敏试验细菌纯培养后，挑选分离的单个菌落，用无菌生理盐水洗下混匀，取0・2niL接种于巧克力培养基上涂布均匀，均匀贴上各药敏纸片，置于37°C恒温箱烛缸培养24h后观察结果，并记录抑菌圈直径大小。2结果与分析2・1菌落形态、染色、镜检和血清学鉴定结果对临床的3群肉鸡均分离到疑似副鸡嗜血杆菌菌株，具体表现为在巧克力培养基上形成灰白色、边缘整齐、光滑隆起、半透明、针尖大小、露珠样的菌落。由

6、表1可知，3群肉鸡分离的菌株革兰氏染色阴性，瑞氏染色蓝色,油镜下可见细菌呈短杆菌或球杆菌，两极着色，3群肉鸡病原分离株与副鸡嗜血杆菌的A型阳性血清均发生完全凝集反应，而与其他两种血清均无凝集反应，故鉴定这3群分离菌株为A型副鸡嗜血杆菌。2・2生化试验结果生化试验结果见表2,3群肉鸡病原分离菌株的生化特性完全一致，即细菌不发酵海藻糖，发酵葡萄糖、蔗糖和麦芽糖；能还原硝酸盐，昭味试验阴性，接触酶阴性，不产生H2S。2・3药敏试验结果由表3可见，该病原菌对头鞄卩塞咲、氟苯尼考和青霉素极敏，对丁胺卡那、阿莫西林高敏，对多西环素中敏，对泰乐菌素低敏

7、，对磺胺卩密喘不敏感。3小结与讨论木研究通过巧克力烛缸培养，A型副鸡嗜血杆菌分离率较高，属于致病菌，由于该次培养未能完全达到5%C02培养箱的条件，导致菌株生长不良，出现菌落数偏少的现象。木研究3群清远肉鸡病原分离菌株在生化特性上表现为发酵葡萄糖、蔗糖和麦芽糖，而但分离菌株能还原硝酸盐，接触酶阴性，"引味试验阴性，不产生H2S,这些结果与罗廷荣等［3］确定副鸡嗜血杆菌的生物化学特性完全一致；3群肉鸡病原菌分离株与副鸡嗜血杆菌的A型阳性血清产生均完全凝集反应，而与其他两种血清均无凝集反应。由以上这些特性可鉴定这3群分离菌株均为A型副鸡嗜血杆

8、菌，说明目前清远地区肉鸡A型副鸡嗜血杆菌的流行占据主导地位［4］。但从近年的文献报道來看，我国部分地区已经有B、C型副鸡嗜血杆菌的存在［5—7］,呈现为近年來我国鸡传染性鼻炎流行的新特点。因此