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1、猪李氏杆菌病的病原分离与药敏试验?138?疾病防治中国畜牧兽医2009年第36卷第8期猪李氏杆菌病的病原分离与药敏试验于金玲,刘孝刚(辽宁医学院畜牧兽医学院,锦州121001)摘要:辽宁省锦州市某养猪场发生了一种以脑炎和败血症为主要病理变化的疾病,采集病死猪病料进行细菌分离培养,涂片,染色,镜检观察,并对其形态特征,培养特性,生化特性,药物敏感性及致病性等生物学特性进行探讨.结果表明,引起该病的病原是产单核细胞增生性李氏杆菌.该菌株对氨苄青霉素,庆大霉素,链霉素,环丙沙星,卡那霉素高度敏感;对新霉素,土霉素,红霉素,头孢唑
2、啉等表现耐药.关键词:猪;李氏杆菌;细菌分离;药敏试验中图分类号:$858.28文献标识码:B文章编号:1671—7236(2009)08—0138—02猪李氏杆菌病是由产单核细胞增生性李氏杆菌引起的畜,禽,啮齿动物和人的一种散发性传染病(宣长和等,2003).该病以脑膜脑炎,败血症和流产及引起单核细胞增多为特征.本病发生具有一定的季节性,多发生在冬春季节,常呈散发性,临床症状和病变不典型,易误诊为猪伪狂犬病,猪传染性脑脊髓炎或猪血凝性脑脊髓炎等.本病虽然发病率低,但病死率较高,可给养猪业造成很大经济损失.2008年12月
3、,辽宁省锦州市某养猪场饲养的80头30～40H龄仔猪突然发病,表现精神沉郁,食欲减少或废绝,腹泻,呼吸困难,运动失调,转圈,角弓反张并出现死亡等;皮肤有紫斑,剖检可见黏膜,浆膜有轻微出血,腹水增多,胃底部有出血斑,小肠充血,心肌有针尖大小灰白色坏死灶,肺肿大,在心叶,尖叶,膈叶表面均有散在的灰红色,灰白色点状病灶,肝脏肿大,颜色变浅,表面有灰白色坏死灶,脾脏肿大,表面有出血点,腹股沟淋巴结,肠系膜淋巴结肿大,脑膜和脑有轻微充血,脑脊液增加,稍浑浊.本次共有9头仔猪发病,死亡5头,发病率为11.25,病死率为55.6.经细菌
4、分离鉴定确定收稿日期:2009—0312作者简介:于金玲(1966一),女,辽宁人,硕士,副教授,主要从事动物病理学教学与科研工作.为产单核细胞增生性李氏杆菌感染,现报道如下.l材料1.1病料无菌采取病死猪的心脏,肝脏,脾脏,肺脏,脑组织,淋巴结等.1.2试验动物18～22g昆明系健康小白鼠6只,健康幼兔1只,均购于辽宁医学院实验动物中心.1.3培养基按常规方法制备鲜血琼脂培养基,普通琼脂培养基,麦康凯琼脂培养基.1.4生化试剂微量生化反应管购自杭州天和微生物有限公司,批号为20080507.1.5药敏纸片药敏纸片购自北京
5、天坛药物生物技术开发公司,批号为200705.2方法2.1病料的涂片,染色与镜检将心,肝,肺,脾,淋巴结和脑等组织涂片,经革兰氏染色,于光学显微镜下观察.2.2病原的分离培养无菌取心,肝,肺,脾,淋巴结和脑等组织,分别接种于普通琼脂,鲜血琼脂,麦康凯琼脂平板培养基上,37℃需氧培养24h,观察生长情况;挑取单个菌落再进行纯培养,革兰氏染色,镜检,观察菌体形态及染色特性.2.3生化试验分离菌经24h血清平板纯培养后,用微量生化反应管按姚火春(2002)的方法进行(AnimalScienceDepartment,Zhengzh
6、ouCollegeofAnimalHusbandry8乙Engineering,Zhengzhou450011,China)Abstract:EggyolkimmunoglobulinsagainstNDandIBDwerepreparedbyimmunizingthehealthyhigh—yieldlayerswithNDvaccineandIBDoil—emulsioninactivatedvaccine,andthetreatmentefficacyofeggyolkimmunoglobulinsagainstND
7、andIBDweredetectedinfortyintensivechickenfarms.Resultsshowedthattheprecautionratereached100,andthecureratewas63to85.Keywords:ND;IBD;eggyolkimmunoglobulins中国畜牧兽医2009年第36卷第8期疾病防治?139?生化试验.2.4动物试验2.4.1结膜囊点眼试验取幼兔1只,用分离菌24h肉汤纯培养物1滴,滴入幼兔一侧结膜囊内,另一侧作为对照,接种后观察幼兔眼睛的变化,记录结果.
8、2.4.2小鼠接种取6只健康小白鼠,随机分成2组,试验组和对照组,每组3只,试验组腹腔注射细菌24h肉汤纯培养物,0.5mL/只;对照组腹腔注射生理盐水,0.5mL/只,隔离饲养1周,观察结果.2.5药敏试验采用纸片法(姚火春,2002),取纯化菌种,用生理盐水适当稀释后,吸取0.1mL接种于琼脂平板表
