复合晚期内皮祖细胞的小肠粘膜下层组织构建小口径人工血管的研究

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1、KSOOCHOWUNIVERSITY博士学位论文BBS!论文题目复合晚期内皮祖细胞的小肠粘膜下层组织构建小口径人工血管的研究研究生姓名戎建杰指导教师姓名李晓强专业名称胸心血管外科研究方向下肢动脉硬化闭塞症论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明:所提交的学位论文是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果,也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明

2、确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:>/J~.[苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定,即:学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论

3、文口本学位论文属在______年_月解密后适用本规定。非涉密论文0^论文作者签名:日期:导师签名:~k^%日期:f中文摘要复合晚期内皮祖细胞的小肠粘膜下层组织构建小口径人工血管的研究复合晚期内皮祖细胞的小肠粘膜下层组织构建小口径人工血管的研究中文摘要【摘要】目的分离、培养、鉴定晚期内皮祖细胞(Endothelialprogenitorcells,EPCs)。将晚期EPCs,作为种子细胞,研究晚期EPCs的生物学特性。制作小肠粘膜下层组织(smallintestinalsubmucosa,SIS),并作为细胞外基质材料,研究与

4、晚期EPCs在体外共培养的生物相容性,以及EPCs在SIS表面的生长情况。观察复合晚期EPCs的SIS构建的小口径人工血管的性能,以及修复兔颈动脉缺损的实验研究。方法骨髓单个核细胞分离后以EGM-2MV培养,采用免疫组化、免疫荧光和流式细胞仪鉴定晚期EPCs相关标志CD34、CDl33、VEGFR-2和vWF的表达;Dil-acLDL和FITC-UEA-1的摄取能力,MTT法绘制晚期EPCs生长曲线;Matigel胶测定晚期EPCs成血管功能;透射电镜观察晚期EPCs向内皮细胞转化的特征。SIS来自于猪的小肠,经过物理和化学

5、的处理制备得到。用光学显微镜观察晚期EPCs在SIS上的生长形态,增殖率通过MTT测定。通过ELISA和免疫印迹法,测定晚期EPCs接种到SIS后生产血管生成素-1(ANG-1)和内皮细胞生长因子(VEGF)的含量。将SIS膜以胶原蛋白和硫酸软骨素混合液粘接,并缝合制作SIS管。体外测试支架爆破压,溶血试验,对凝血时间的影响。接种晚期EPCs,并扫描电镜观察接种情况。移植入兔颈动脉缺损处,定期行彩超和DSA检查观察移植血管的情况。行组织学检查观察移植入的SIS管重塑情况,扫描电镜和荧光显微镜观察血管内皮细胞层情况。结果早期E

6、PCs呈集落样生长,晚期EPCs表现出鹅卵石形态,纺锤状的形状。晚期EPCs表面抗原标志物CD34,CD133,VEGFR-2,vWF表达为不同程度的阳性;流式细胞仪检测显示早期EPCs的CD133含量较高,后逐渐降低;晚期EPCs的VEGFR-2含量上升。晚期EPCs增殖明显,形成网状连接的管腔样结构。电镜下晚期EPCs可见到内皮细胞特征性细胞器-Weible-Palade(W-P)小体。光镜显示,机械和化学处理的小肠粘膜下层是由细胞外基质组成。晚期EPCs和SIS共同培养后,细胞增殖率明显提高,并能够在SIS上粘附,生长

7、和增殖。共同培养后,ANG-1的分泌量在第1d时就II复合晚期内皮祖细胞的小肠粘膜下层组织构建小口径人工血管的研究中文摘要较单纯的晚期EPCs组升高,随着时间的延长逐渐升高,到第7d时分泌量达到最高,后逐渐下降。VEGF的分泌量呈随着时间的延长逐渐升高后,一直稳定在较高的水平。免疫印迹分析进一步表明,晚期EPCs播种到SIS的表面上ANG-1和VEGF均有明显的升高。制作的SIS管有良好的爆破压,能够延长凝血时间,符合医用材料的溶血率试验要求,不会对血细胞造成破坏。接种的细胞能够在SIS管上生长。复合晚期EPCs的SIS管在

8、8w时有50%的通畅率。组织学显示,SIS已经有很好的重塑反应,可见胶原纤维和平滑肌细胞。扫描电镜可见完整的内皮细胞层,部分内皮细胞来源于标记的晚期EPCs。结论骨髓中存在不同特质的早期EPCs和晚期EPCs,晚期EPCs增殖强,具有成血管能力,能够转化为内皮细胞,有限的实验结果表明,晚期

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