人间充质干细胞内源性抗氧化水平影响干细胞存活的分子机制研究

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1、．？分类号Ｒ５１密绒公开，ＵＤＣ６１０学校代码１０５巧．＇义際：或＃＠‘爹硕：±ｒ学位论文（专业学位）：人间充质干细胞内源性抗氣化水平ｆ，ｔ影响干细胞存活的分子机制研究．＇？ｉ；？’＞．ｖ．、：研究生姓名：由；薛文；指导教师、职称：刘映霞教授‘合作导师、职称：＇专业学位类别（领域）．；临床医学（内科学）．研究方向’：肝脏疾摘的干细胞治疗？所在学院：深圳市第Ｈ人民医院二〇—五年五月‘Ｉ’■人间充盾干细月包内

2、源性抗氨化水平影响干细胎＞存活的分子机制研究、私论文作者签名指导教师签名；论文评阅人１；吴诗曲，教授，硕导，暨南大学评阅人２：何葱葱，副教巧，博导，暨南大学评阅人３；答辩委员会主席：周伯平，教巧，博导，南化大学媒圳市第兰人民戾院１委员；単大学研究牛院，教授，博导雷小勇，南委员２；吴诗品授硕导圳市人民民院，教，，深委员３；陆坚，教巧，硕导，南华大学深圳市第Ｈ人民睽院委员４；背伟，副研究员，硕导，暨南大学免疫牛物学系委员５；委员６；答辩日期：２０１５年５月１４日南华大学学位论文原创

3、性声明工本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进斤的研究作及取得的研究经成果。尽我所知，除了论文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明碗的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：Ｍ少年少月円巧南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得

4、其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可Ｗ公布学位论文的全部或部分内容，可Ｗ采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：、：＾

5、年ｊｒ月日＾导师签名：年巧円７戶人间充质干细胞内源性抗氧化水平影响干细胞存活的分子机制研究摘要：目的：本研究旨在探讨人间充质干细胞内源性抗氧化水平影响干细胞存活的分子机制。方法：利用细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）/双氧水（H2O2）协同诱导了一个与体内环境相似的体外氧化炎症压力环境。应用依达拉奉作为抗氧化剂和马来酸二乙酯（diethylmaleate，DEM）作为促氧化剂预处理人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）后的不同时间点，测定干细胞存活

6、能力、细胞凋亡和内源性抗氧化水平的动态变化。其中，采用免疫荧光染色法和caspase-3/7活性法测定细胞凋亡的变化；用MTT评估细胞活性；用活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）染色和GSH/GSSH比值显示细胞内抗氧化水平。然后，用定量PCR系统检测细胞抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax-1的mRNA表达水平变化；用蛋白免疫印迹法（Westernblot，WB）测定内源性抗氧化酶中超氧化物歧化酶1（superoxidedismutase-1，SOD1）、过氧化氢酶（catalase，CAT）和MAPK、PKC通路各蛋白的表达变化

7、；用试剂盒测定Nrf2转录活性，以期对调控干细胞凋亡和内源性抗氧化水平的分子机制进行探究。最后，用PD98059和staurosporine分别阻断MAPK和PKC通路；用基因沉默的方法阻断Nrf2的抑制蛋白质Keap1的表达，进一步验证MAPK-PKC-Nrf2通路在影响干细胞内源性抗氧化水平中的作用。I结果：(1)与对照组比较，LPS/H2O2处理组干细胞活性降低(P<0.05)；与LPS/H2O2组比较，促氧化剂DEM预处理后在所有时间点都进一步降低了干细胞活性(P<0.05)；与LPS/H2O2组比较，两种不同浓度的依达拉奉处理组（Eda）均提高了L

8、PS/H2O2刺激下干细胞的增殖活性，差异均有统计学