mir-106be靶向调控bmp2参与间充质干细胞成骨分化与体内骨形成

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文WMmmiR-106b靶向调控BMP2参与间充质干细胞论文题目成骨分化与体内骨形成刘可研究生姓名施勤指导教师姓名免疫学专业名称干细胞分化调控研究方向2015年4月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：廳交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引膽内容外，本论文不含其他t人或集fr已经发表或撰写过的研究成果，ft不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：到却曰軋

2、抓^苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文;可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在—年—月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：曰期：KV•J导师签名：省处曰期：‘^1

3、指导小组成员：顾巧丽张文赵环周熙超miR-106b靶向调控BMP2参与间充质干细胞成骨分化与体内骨形成摘要摘要目的：MicroRNA作为一类具有调节作用的小RNA分子，参与众多生理过程。BMP2蛋白在间充质干细胞（MSCs）成骨分化过程中发挥关键作用。本实验探讨了miR-106b调控MSCs成骨分化及在小鼠糖皮质激素诱导的骨质疏松症（GIOP）骨形成中的作用机制。方法：实时定量PCR（microRNA特异性探针法或EVAGreen法）确定miR-106b在成骨分化过程中的变化趋势及与成骨相关基因（RUNX2、ALP、OSTERIX、COL1A1）的相关性；生物信息学预测mi

4、R-106b与BMP2的靶向性，利用miR-106bmimic、miR-106binhibitor在MSCs过表达或缺失表达miR-106b进而确定miR-106b的功能；荧光素酶报告基因实验（Luciferaseassay）与WesternBlot检测microRNA与骨形成蛋白2（BMP2）之间的靶点关系；使用慢病毒-miR-106binhibitor干预小鼠糖皮质激素诱导的骨质疏松症（GIOP）；采用组织化学和micro-CT分析miR-106binhibitor对GIOP的影响；在mRNA和蛋白质水平检测骨形成和骨吸收相关的指标及BMP2/SMAD信号通路涉及的分子

5、；结果：实时定量PCR结果表明，miR-106b在成骨分化过程中表达水平降低；过表达miR-106b抑制MSCs成骨分化；在Luciferaseassay中，结果显示mimic共转染组荧光值低于对照组，靶点突变后该效应逆转；qRT-PCR和WesternBlot实验结果表明转染miR-106b过表达降低BMP2mRNA和蛋白质水平，inhibitor则产生相反的效果；干预GIOP的实验中，miR-106binhibitor能够增加骨质量、提高成骨细胞数目、骨形成率，提高血清中PINP的水平，同时增加BMP2、SMAD1和SMAD5mRNA的表达水平。此外，miR-106bi

6、nhibitor还降低了血清中CTx-1的水平。结论：在MSCs成骨分化过程中，miR-106b靶向结合BMP23’UTR序列并抑制BMP2基因的表达，进而抑制MSCs的成骨分化。在C57BL/6小鼠中抑制miR-106b表达可以活化BMP2/SMAD信号通路，促进骨形成，从而缓解糖皮质激素诱导的骨质疏松症。关键词：间充质干细胞；骨形态发生蛋白2；miR-106b；成骨分化；骨质疏松症作者：刘可指导教师：施勤I英文摘要miR-106b靶向调控BMP2参与间充质干细胞成骨分化与体内骨形成MiR-106bRegμlatesOsteogenicDifferentiationofM

7、SCsandBoneFormationinvivobyRegulatingBMP2AbstractAim:MicroRNAsasageneregμlatorwereinvolvedinmanybiologicalprocesses.Bonemorphophogeneticprotein2(BMP2)playsanimportantroleinosteogenesis.WeinvestigatethemechanismoftheeffectofmiR-106bonosteogenicdifferentiationof