gaba a受体研究及双氟沙星对异育银鲫安全性评估

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1、学校代码：10264研究生学号：M120104145上海海洋大学硕士学位论文GABAA受体研究及双氟沙星论文题目：对异育银鲫安全性评估StudyofGABAAreceptorandsafetyevaluationof英文题目：Difloxacin(DIF)onCarassaisauratusgibebiol专业：临床兽医学研究方向：水产动物医学姓名：赵依妮指导教师：杨先乐教授二零一五年六月七日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立

2、进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海水产大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文GABAA受体研究及双氟沙星对异育银鲫安全性评估摘要在中国水产养殖业高速发展的同时，各类水产病害亦迅速增加，药物防治作为中国水产动物疾病防治的主要方式，其安全性已经引起了社会的普遍关注。而要保证水产养殖动物及养殖生态环境的安全，就必须重视渔药的安全性评估。γ-氨基丁酸(GABA

4、)作为机体中枢神经系统主要的抑制性神经递质，其神经调节功能主要通过GABA受体(GABAR)起作用。根据药理特性的不同，可将GABA受体分为GABAAR、GABABR和GABACR三种类型，其中A型受体是最主要的受体，在动物界有广泛分布。该受体上除了GABA及其抑制剂荷包牡丹碱亲和位点外，还存在其他3种GABA激动剂、拮抗剂的结合位点(苯二氮卓位点；巴比妥盐位点；抑制剂苦毒宁和TBPS(t-Butylcyclophosphorothionate)位点)，它们可直接或间接影响GABA与GABAA受体的亲和力，亦

5、或增加或降低氯离子通道开放频率，进而影响中枢神经系统的抑制性神经调节功能。目前有关GABA和GABAA受体的研究还主要集中在哺乳动物相关疾病的病理和药理研究，以及新型农用杀虫剂的研发，而在水产养殖中的研究还很少。然而阿维菌素、氟喹诺酮类、有机氯类药物亦可用于水产动物疾病的防治过程中，这些药物在作用于病原体的同时，亦可作用于非靶动物即养殖动物体内的药物受体，进而给养殖动物亦造成了不可忽视的伤害。到目前为止，前人的研究多是集中于探究药物作用后对GABA含量、GABA与受体亲和力、氯离子开放频率的影响，很少涉及GA

6、BA受体含量的变化。而以药物受体研究药物影响及其安全性具有针对性、特异性的优势，因此，本研究以GABAA受体作为检测指标，克隆异育银鲫体内的GABAA受体亚基，并采用荧光定量PCR、Westernblot蛋白印记和免疫组织化学染色对健康异育银鲫体内GABAA受体在表达模式进行分析，最后对双氟沙星(DIF)作用后GABAA受体基因和蛋白表达的变化进行研究，从而评估双氟沙星对异育银鲫的安全性，为推进中国渔药安全性评估体系建设具有一定的理论指导意义，有利于提高中国水产养殖过程中渔药的安全使用，推动水产养殖业的可持续

7、发展。本论文的主要研究及结果如下：（1）采用RACE(rapid-amplificationofcDNAends)法克隆得到了异育银鲫i上海海洋大学硕士学位论文GABAA受体γ2亚基基因全长cDNA，并进行了生物信息学分析。该基因长2763bp，其中CDS区长1437bp，可编码477个氨基酸的前体蛋白。预测蛋白分子量55.3kD，理论等电点9.13。异育银鲫体内GABA-A受体γ2亚基氨基酸序列N端存在1个长度为35个氨基酸的信号肽，4个长度分别为23、20、23和23个氨基酸的跨膜区，3个N-糖基结合位点

8、和2个O-糖基化位点，1个特异性结构域，其氨基酸序列具有明显的氯离子门控通道家族特征。氨基酸序列与其他物种氨基酸序列的同源性都在89%以上，表明该蛋白属于GABAA受体亚基家族。系统进化树表明异育银鲫与斑马鱼聚为一支，亲缘关系最近。（2）采用荧光定量PCR、Westernblot蛋白印迹和免疫组织化学染色法研究了GABAA受体在健康异育银鲫体内组织特异性分布情况。荧光定量结果显示，GABAA受体在脑