hmnsod及其异构体在肿瘤转移中的作用

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：hMnSOD及其异构体在肿瘤转移中的作用EffectsandmechanismofalternativesplicedhMnSODisoformsontumormetastasis作者姓名：杨恩泽指导教师姓名：王峰及学位、职称：博士/副教授学科、专业名称：微生物与生化药学学位类型：学术学位论文提交日期：2015年6月19日论文答辩日期：2015年5月26日答辩委员会主席：黄亚东研究员论文评阅人：郑青教授郑辉研究员学位授予单位和日期：暨南大学2015年7月1日独创性声明本人声明所S文的学位论文S本人在导Him导下进行的研宂;I:作及取得的ra宂

2、成《•餘了文中将别加以标注和a«的地方外，论x屮不a含其他人己钤犮s.成》写过的究成®，也不a含为驻柯g南大学或Kfe教台机构的学也成证书而迚用过的材对•与我R.丨:怍的司志对本研允所《的任何；HW均己在论文中作了明确的说明并*尔谢学位论文作资签名：奶氬丨年签字R期!^年彡《以日学位论文版权使用授权书木y位论文作g完全了Kg南大学齐关保笛、使用学位论文的《定•有K保®并间田*有关K门a机构送交论文KStn件和BS.允许论文披进本人gt乂g南大学呵以辂孕ft论文的企部成《分为容编入有关》挞床讲行检S•可以采用影印、缩幻成灼描碎SWT8保存、ir编学位沦文•CS密的学®论文在鮮密fi

3、iS用本HS书）学位论义作SS名，梅邑涔笠字13期：年6月/t日宁位论文作有毕业运去向《工作#位《电达:通讯W.tt:暨南大学硕士学位论文中文摘要目的：研究hMnSOD在肿瘤转移过程中的作用并对其分子机制进行初步探索，探讨hMnSOD异构体对肿瘤转移影响的差异。方法：对不同种类细胞中hMnSOD及其截短型异构体的表达谱进行分析并测定其SOD活力。构建hMnSOD及其截短型异构体的重组逆转录病毒过表达载体、逆转录病毒shRNA敲降载体以及TALEN基因打靶敲除载体，过表达/敲降A549和95-D细胞的hMnSOD及其截短型异构体。通过transwell迁移实验测定hMnSOD对肿瘤

4、细胞迁移能力的改变，Q-PCR和WesternBlot检测肿瘤转移及其信号通路相关因子的表达量。并通过外源添加的方法检测hMnSOD-R9蛋白及SOD抑制剂DDC对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果：成功构建了pMXs-hMnSOD和pMXs-hMnSODc逆转录病毒过表达载体、pSuper-shhMnSOD逆转录病毒基因敲降载体和TALEN-hMnSOD基因敲除载体。A549和95-D细胞在过表达hMnSOD后迁移能力显著增强，过表达hMnSOD截短型异构体hMnSODc后迁移能力有小幅增强，敲降hMnSOD后迁移能力减弱。hMnSOD及其截短型异构体hMnSODc能够上调A549和

5、95-D细胞中Akt、JNK、IKKβ、VEGF、MMP-1、MMP-2、Vimentin，下调E-cadherin，另外能够下调A549细胞中HIF-1α的表达而上调95-D细胞中的HIF-1α；hMnSODc作用效果较hMnSOD弱。hMnSOD-R9蛋白能促进肿瘤细胞95-D转移，DDC能够消除抑制这一作用。结论：hMnSOD能够通过激活Akt和JNK通路，促进IKKβ的转录，激活NF-κB。最终促进MMP-1、MMP-2和VEGF的表达，抑制E-cadherin基因和上调Vimentin的表达量，诱导EMT过程，增强肿瘤细胞的转移能力。hMnSOD的截短型异构I暨南大学硕

6、士学位论文体hMnSODc具有相似的作用，但效果较hMnSOD要弱。关键词：锰超氧化物歧化酶，剪接异构体，表达调控，肿瘤转移II暨南大学硕士学位论文ABSTRACTPurpose:TheaimofthisstudyistoinvestigatetheeffectsandmolecularmechanismofthehMnSODisoformsontumormetastasis.Methods:ThehMnSODexpressionandtheSODactivityofdifferentkindsofcellsweredetected.RetroviralvectorsofhMnS

7、ODisoformsoverexpressionorknockingdownandgenetargetingvectorofhMnSODwereconstructed.Transwellmigrationassaywasusedtodetectedthechangingoftumorcellmigrationability.TherelatedfactorsofsignalpathwaysweredetectedbyQ-PCRandWesternBlot.Moreover,the