齐墩果酸对血管紧张素ⅱ诱导乳小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制

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1、中图分类号：R541J;R541.4〗R541.6医_大摩SICHUANMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文齐缴果酸对血管紧张素II诱导乳小鼠’I、肌成纤维细胞增殖的影晌及其机制院（系）、所临床医学脘------研究生姓名_^_^____S-------学科、专必内科学-导师姓名李家富it遞---------二〇一五年四月目录齐墩果酸对血管紧张素II诱导乳小鼠心肌成纤维细胞增殖的1影响及其机制…………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………

2、11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………61.4材料与方法……………………………………………………91.5结果……………………………………………………………221.6讨论……………………………………………………………361.7结论……………………………………………………………421.8参考文献………………………………………………………431.9英汉缩略词对照表……………………………………………502致谢…………………………

3、…………………………………51核转录因子Nrf2对心血管的保护作用研究进展（综述）3…………………………………………………………………52四川医科大学硕士学位论文齐墩果酸对血管紧张素II诱导乳小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制摘要目的：探索齐墩果酸（Oleanolicacid,OA）对血管紧张素II(angiotensinII,AngII)诱导乳小鼠心肌成纤维细胞（cardiacfibroblasts，cFs）增殖的影响，并探讨可能存在的机制。方法：1、乳小鼠心肌成纤维细胞的培养与鉴定：取乳小鼠

4、，经手术取其心脏心室，酶消化差速贴壁法培养，特异性抗体荧光免疫法鉴别cFs。2、观察OA对cFs增殖活性的影响：实验分组：①正常对照组（0μm）；②OA（10μm）组；③OA（20μm）组；④OA（40μm）组；⑤OA（60μm）组；⑥OA（80μm）；⑦OA（100μm）组；分别于12h、24h、48h、72h、96h四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测细胞增殖情况。3、观察AngII对cFs增殖的影响：实验分组：①正常对照组-5-6（0mol/L）；②AngII（10mol/L）组；③

5、AngII（10mol/L）组；④AngII-7-8（10mol/L）组；⑤AngII（10mol/L）组，分别于24h、48h、72h、96h采用MTT检测细胞增殖活性情况。4、观察OA对AngII诱导cFs增殖的影响：将cFs预先用AngII处理后备用，实验分组为：①正常对照组；②AngII-7-7-7（10mol/L）组；③AngII（10mol/L）+OA（50μm）组；④AngII（10mol/L）+OA（50μm）+ZnppIX（10μm，HO-1酶活性阻断剂），孵育36h，MTT检测

6、细胞增殖活性，荧光定量RT-PCR检测①②③组细胞中Nrf2、HO-1mRNA的表达。5、有效慢病毒的筛选：实验分组为：①正常对照组、②Nrf2干扰慢病毒组、③空病毒组，孵育96h，荧光显色法直接观察GPF显色以及荧光定量RT-PCR法检测细胞内Nrf2表达量。6、检测OA对AngII诱导经Nrf21干扰慢病毒感染的cFs内Nrf2、HO-1mRNA的表达：经病毒感染后的cFs用-7AngII预处理备用，实验分组：①正常对照组;②AngII（10mol/L）组;③AngII-7-7（10mol/L

7、）+OA（50μm）组；④OA（50μm）+AngII（10mol/L）+空病-7毒组；⑤OA（50μm）+AngII（10mol/L）+Nrf2干扰慢病毒组。MTT检测细胞增殖活性情况，荧光定量RT-PCR检测细胞内Nrf2、HO-1的mRNA的表-8达量。结果：（1）10-100μm浓度的OA对正常cFs活性无明显影响；（2）10、-7-6-510、10、10mol/L浓度的AngII均可促进cFs增殖，且存在浓度时间依赖-7性，在10mol/L浓度24h时AngII的增殖效应最强。（3）OA

8、能显著抑制AngII诱导的乳小鼠cFs的增殖作用，并促进细胞内的Nrf2、HO-1mRNA量的表达，当加入ZnPPIX后OA的抑制作用显著减弱。（4）荧光显微镜及定量RT-PCR检测显示Nrf2干扰慢病毒成功感染cFs，感染率约79%。（5）Nrf2的表达被干扰后OA抑制AngII诱导的cFs增殖效应显著减弱，细胞内HO-1mRNA的表达量显著减少。结论：（1）OA能抑制AngII诱导cFs的增殖，并促进细胞内Nrf2、HO-1mRNA的表达。（2）核转录因子Nrf2参与了OA在c