temporin-1ceb改造肽对lps诱导炎症反应的影响及其作用机制的研究

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1、＇心，分类号；学校代码：１０１６５密级；学号：２０１２１１００１０９３遠穿郎筵乂學硕±学位论文？Ｔｅｍｏｒ－ｐｉｎｌＣ卧改造肋对ＬＰＳ诱导炎症反应的影响及其作用机制的研究？？－，Ｉ？Ｖ．．、，．，作者姓名：间欣＂学科、专业：遗传学研究方向：分子遗传导师姓名；尚德静教授‘一．Ｖ＾２０１５０３．年月－＊？＇．Ｖ１二．？．．．．ｒ、＇＊？、－，＞？一？—Ｉ．＾－＇．．＊－—；－．？．山‘■＇一：Ｉ－．巧ｒ

2、‘／．学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助。，均己在讫文中做了明确的声明并表示谢意秋学位论文作者签名；汹学位论文版权的使巧授权书本学位论文作者完全了解迁宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部口或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权，可１迂宁师范大学，可＾将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索１＾采用影印、缩印或扫描等复制手段

3、保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质－－论文的保内容相致。密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：尚仿、指导教师签名！签名日期：年月日分类号：学校代码：10165密级：学号：201211001093硕士学位论文Temporin-1CEb改造肽对LPS诱导炎症反应的影响及其作用机制的研究作者姓名：阎欣学科、专业：遗传学研究方向：分子遗传导师姓名：尚德静教授2015年03月辽宁师范大学硕士学位论文摘要脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，又称内毒素，是诱发炎症反应的主要原因，过度的炎症反应会使生物体患脓毒症等疾病，甚至会导致生物体死亡。抗

4、菌肽是生物体先天性免疫系统的重要组成成分，具有分子量小、理化性质稳定、对哺乳动物没有毒性、广谱的杀菌活性、自身不易引发耐药性及抗炎等特性。本实验室前期研究发现：temporin-1CEb四种改造肽L-K6，L-K5，L-K6V1，L-K6V2具有很好的杀菌活性及溶血性低等特性。四种抗菌肽分别带5-6个净正电荷，可以与带负电荷的LPS结合。所以本论文以人单核细胞U937为研究模型，探究四种抗菌肽对LPS介导的炎症反应的影响及其作用机制。四种抗菌肽对U937细胞毒性实验结果表明，L-K6，L-K5，L-K6V1，L-K6V2对U937细胞的毒性很小。当抗菌肽在低浓度时，基本对细胞无毒性；当抗菌肽

5、在高浓度时，L-K5，L-K6V1，L-K6V2对细胞的毒性不大，细胞的存活率仍然达到85%左右，杀伤力最强的L-K6处理的细胞存活率也能达到70%。说明这四种抗菌肽都能作为抗炎的实验材料。LPS侵入生物体内后，可以激活免疫细胞，诱使其释放炎症因子，如TNF-α、IL-8、NO等，进而引发炎症。我们的实验结果显示抗菌肽L-K6，L-K5，L-K6V1，L-K6V2能够明显抑制LPS诱导的炎症因子TNF-α、IL-8、NO的释放。即使在低浓度20µM时，四种抗菌肽也能很好的抑制TNF-α、IL-8、NO的释放，其中，L-K6的抑制能力最强。综上可见，四种抗菌肽都有抑制LPS诱导炎症反应的能力。

6、圆二色谱（CD）和等温滴定量热仪（ITC）测定四种抗菌肽与LPS的结合能力。CD实验结果显示四种抗菌肽在SP缓冲溶液中均呈无规则卷曲结构，但在LPS溶液中，四种抗菌肽的二级结构呈现规则的α-螺旋结构，说明LPS可以诱导抗菌肽形成规则结构；ITC实验表明抗菌肽的正电荷可以通过静电作用与LPS的负电荷结合，其中L-K6和L-K6V1与LPS的结合能力强于L-K5和L-K6V2与LPS的结合能力。四种抗菌肽都能使LPS聚集体解聚，L-K6处理后，直径在6000nm大小的LPS全部消失，L-K5解聚程度相对较弱。四种抗菌肽都能很好的抑制LPS与细胞结合，其中L-K6的抑制能力最强，L-K5的抑制能力

7、相对较弱。细胞流式实验也证明四种抗菌肽通过与CD14的相互作用，直接抑制了LPS与细胞炎症信号传导通路受体CD14的结合，L-K6和L-K6V1的抑制效果强于L-K6V2和L-K5。RT-qPCR检测抗菌肽对MyD88、IκK、NFκB表达的影响。实验结果表明：抗菌肽能够不同程度的抑制MyD88、IκK、NFκB的表达，其中L-K6的抑制能力最强。-I-Temporin-1CEb改造肽对LPS诱导炎症反应的影