镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122301HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化研究生：斬晶晶导师：徐金升教授专业：内科学2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权

2、均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。，.研究生签名：針画蟲导师签学院领导盖章：年>月乂日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。义研究生签名：ft荔為导师签考々(j^J年4月y曰目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4英文缩写………………………

3、………………………………………………8研究论文镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化前言…………………………………………………….………….…....9材料与方法……………………………………………………………11结果……………………………………………………………………19附图……………………………………………………………………21附表……………………………………………………………………25讨论……………………………………………………………………26结论……………………………………………………………………29参考文献………

4、………………………………………………………30综述镁在慢性肾脏病血管钙化中的作用…………………………….32致谢………………………………………………………………………41个人简历……………………………………………………………………42中文摘要镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化摘要目的：血管钙化是慢性肾脏病（CKD）患者的常见并发症，与心血管疾病（CVD）死亡率密切相关。众所周知除传统危险因素，非传统因素，如尿毒症毒素、矿物质代谢紊乱，尤其是高磷血症，在血管钙化的发生发展中起着重要的作用。其中高磷可通过很多途径诱导血管

5、平滑肌细胞（VSMCs）发生钙化，如血管平滑肌细胞凋亡、骨源性分化、钙化促进因子(如：核心结合因子α-1)及抑制因子(如：基质G蛋白；骨桥蛋白质)的平衡紊乱等。因此由于血管钙化发生的机制十分复杂，致使目前对血管钙化尚无有效的预防和治疗方法。镁离子作为体内重要的阳离子对维持血管弹性和心脏节律有重要的作用，因此近年来镁离子与血管钙化之间的关系备受关注，有临床研究发现碳酸镁可能会抑制冠状动脉钙化的进展，但镁离子和血管钙化之间的确切关系目前尚不完全明确，因此本研究旨在探讨增加镁离子浓度后对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制。方法

6、：1VSMCs原代培养取5周龄雄性健康SD大鼠胸主动脉通过组织贴壁法进行VSMCs原代培养，应用形态学和免疫学方法进行平滑肌细胞鉴定。2实验干预及分组随机将VSMCs分为4组：（1）正常对照组：加入10%胎牛血清的低糖DMEM培养基；（2）高磷组：正常培基中加入10mmol/Lβ-甘油磷酸(β-GP)；（3）镁干预组：在高磷培基中加入3mmol/L硫酸镁（MgSO4）；（4）镁通道抑制剂（2-APB）干预组：高磷培基中加入3mmol/LMgSO4-4及10mol/L2-APB。各组VSMCs分别培养0、3、6、10、14天

7、。3在培养14天后测定各组VSMCs的钙化水平各组VSMCs的钙化染色应用茜素红（Alizarinredstain）方法；各组VSMCs钙含量测定应用邻甲酚酞络合酮比色法。4在培养14天后测定各组VSMCs的碱性磷酸酶（ALP）活性将各组VSMCs培养14天后弃去其上清液，依据ALP活性试剂盒测1中文摘要定ALP活性，此过程严格按照试剂盒说明书进行操作。5在不同时间点测定各组VSMCs核心结合因子α-1（Cbfα1）mRNA的表达应用逆转录PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对照组、高磷组、镁干预组以及14

8、天时镁通道抑制剂干预组Cbfα1mRNA的表达。6在不同时间点分别检测各组VSMCs中基质G蛋白（MGP）mRNA和骨桥蛋白质（OPN）mRNA的表达。应用RT-PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对照组、高磷组、镁干预组以及14天时镁通道抑制剂干预组VSMCsMGPmRNA和OPNmR