镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化-内科学专业毕业论文

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。二学院领导盖章：’t‘驯芎4、年≥月弭日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审

2、定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：轩晶晶导师签p侈年弓月；)日万方数据目录中文摘要l英文摘要4英文缩写8研究论文镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化—1L—JL刖吾9材料与方法11结果19附图21附表25讨论26结论29参考文献30综述镁在慢性肾脏病血管钙化中的作用．32致谢41个人简历42万方数据中文摘要镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化摘要目的：血管钙化是慢性肾脏病(CKD)患者的常见并发症，与心血管疾病(CVD)死亡率密切相关。众所周知除传统危险因素，非传统因素，如尿毒症毒素、矿物质代谢紊乱，尤其是高磷血症，在血管钙化的发生发展中

3、起着重要的作用。其中高磷可通过很多途径诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)发生钙化，如血管平滑肌细胞凋亡、骨源性分化、钙化促进因子(如：核心结合因子0【．1)及抑制因子(如：基质G蛋白；骨桥蛋白质)的平衡紊乱等。因此由于血管钙化发生的机制十分复杂，致使目前对血管钙化尚无有效的预防和治疗方法。镁离子作为体内重要的阳离子对维持血管弹性和心脏节律有重要的作用，因此近年来镁离子与血管钙化之间的关系备受关注，有临床研究发现碳酸镁可能会抑制冠状动脉钙化的进展，但镁离子和血管钙化之间的确切关系目前尚不完全明确，因此本研究旨在探讨增加镁离子浓度后对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的

4、机制。方法：1VSMCs原代培养取5周龄雄性健康SD大鼠胸主动脉通过组织贴壁法进行VSMCs原代培养，应用形态学和免疫学方法进行平滑肌细胞鉴定。2实验干预及分组随机将VSMCs分为4组：(1)正常对照组：加入10％胎牛血清的低糖DMEM培养基；(2)高磷组：正常培基中加入10mmol／LB一甘油磷酸(p．GP)；(3)镁干预组：在高磷培基中加入3mmol／L硫酸镁(MgS04)；(4)镁通道抑制剂(2．APB)干预组：高磷培基中加入3mmol／LMgS04及10～mol／L2-APB。各组VSMCs分别培养0、3、6、10、14天。3在培养14天后测定各组VS

5、MCs的钙化水平各组VSMCs的钙化染色应用茜素红(Alizarinredstain)方法；各组VSMCs钙含量测定应用邻甲酚酞络合酮比色法。4在培养14天后测定各组VSMCs的碱性磷酸酶(ALP)活性将各组VSMCs培养14天后弃去其上清液，依据ALP活性试剂盒测万方数据中文摘要定ALP活性，此过程严格按照试剂盒说明书进行操作。5在不同时间点测定各组VsMCs核心结合因子0【．1(Cbfal)mRNA的表达应用逆转录PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对照组、高磷组、镁干预组以及14天时镁通道抑制剂干预组CbfalmRNA的表达。6在不同时间

6、点分别检测各组VSMCs中基质G蛋白(MGP)mRNA和骨桥蛋白质(OPN)mRNA的表达。应用RT-PCR分别检测0天、3天、6天、10天、14天时正常对照组、高磷组、镁干预组以及14天时镁通道抑制剂干预组VSMCsMGPmRNA和0PNmRNA的表达。7统计学处理应用SPSSl9．0软件进行数据统计学分析，实验数据应用均数±标准差表示，多组问均数差异比较应用单因素方差分析(ANOVA)，组间均数两两比较应用SNK检验，P<0．05认为差异有统计学意义。结果：1大鼠VSMCs的原代培养大鼠原代VSMCs采用组织块贴壁法获得，一般情况下动脉组织块贴壁后约3～4

7、天即可爬出少量细胞，细胞形状主要为长梭形，并以束状形式排列，组织块贴壁6—7天后细胞融合成片，细胞形状仍以梭形为主。当细胞处于亚融合状态时即可传代，传代后的细胞开始为椭圆形或者圆形，待细胞贴壁后可逐渐伸展为梭形，细胞浆丰富，细胞核呈圆形或者卵圆形，细胞重叠生长，呈现出“峰．谷"样。c【．平滑肌肌动蛋白抗体(Ⅸ．SMAactin)是血管平滑肌细胞特异性抗体，免疫学方法检测的阳性结果为平滑肌细胞胞浆内强表达0l—SMAactin，胞浆内呈现棕黄色。2高镁抑制高磷诱导的VSMCs钙化及ALP活性各组VSMCs钙化染色结果：与正常对照组相比，高磷组可见大量橘红色钙盐沉

8、积；与高磷组相比，镁干预组细胞钙盐沉积