黄曲霉拮抗菌株的分离筛选及对黄曲霉毒素的降解效果

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1、12分类号：S816.3单位代码：10086密级：公开学号：2012076黄曲霉拮抗菌株的分离筛选及对黄曲霉毒素的降解效果Isolation、screeningandAflatoxinB1-degradingofthestrainantagonisttoAspergillusflavus学位申请人：韩愈杰指导教师：吴国江副教授朱宝成教授学科专业：微生物与生化药学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三十日3摘要饲料及原料在运输和储存过程中极易受霉菌污染，霉菌污染的饲料不仅破坏其营养成分，同时霉菌及其产生的毒素影响动物的安全及生产效率，且通

2、过食物链间接影响到人类的安全和健康。黄曲霉是引起饲料霉变的常见菌株，黄曲霉毒素是毒性最强、分布最广、污染最严重的毒素。常用的黄曲霉及毒素的防治方法有物理法、化学法及生物法，而生物法效率高且安全无污染，因此成为国内外研究的热点。本试验利用平板对峙法初筛和抑菌率法复筛，从土壤中分离得到一株高效抑制黄曲霉的菌株N-2，通过形态观察、生理生化测定和16SrDNA序列分析，确定其为解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens。通过急性毒理试验研究发现，菌株N-2安全无毒。菌株N-2通过改变黄曲霉菌丝形态及降低黄曲霉孢子萌发率抑制黄曲霉生长。菌株N-2使黄

3、曲霉菌丝变粗而短，菌丝体内部原生质体分布不均匀，对黄曲霉孢子萌发抑制率为81.08%。通过菌株N-2抑制黄曲霉活性组分分析试验发现，菌株N-2发酵液和无N-2菌体上清液对黄曲霉的抑制率显著高于胞悬液和胞内液，而菌株N-2发酵液和无N-2菌体上清液对黄曲霉的抑制率无差异（P＞0.05），因此，可以推测菌株N-2抑制黄曲霉生长的活性物质为胞外分泌物。菌株N-2发酵液能降解黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1,AFB1），降解率为37.81%。微生物经口进入胃肠道后，必须耐受胃酸低pH及肠道中胆盐高渗环境才能发挥其作用，本试验结果表明，模拟胃液处理菌株N-24h，其活

4、菌数达96.11%。模拟胆盐处理菌株N-224h，其活菌数达95.68%。菌株N-2对大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌有抑制效果，抑菌圈直径分别为19.57mm、18.39mm、17.92mm。本试验利用N-2发酵液进行饲喂肉鸡试验，通过检测肉鸡的生长性能、血液生化指标及器官的组织切片等，研究不同剂量菌株N-2的发酵液对肉鸡饲料中的黄曲霉毒素降解效果。试验结果表明，基础日粮每千克添加0.2L菌株N-2发酵液能改善AFB1对肉鸡的毒害作用，降低了毒素对肝脏损伤，维护了肉鸡肠道菌群的平衡。本研究试验结果表明，试验分离筛选得到的解淀粉芽孢杆菌N-2对黄曲霉有显著抑制效果，其

5、安全无毒，对胃酸和胆盐有耐受性，且能降低AFB1对动物的毒害作用，为研制黄曲霉及黄曲霉毒素生物防治菌剂提供了理论基础及试验依据。关键字：饲料霉变；黄曲霉；黄曲霉毒素；解淀粉芽孢杆菌；降解4黄曲霉拮抗菌株的分离筛选及对黄曲霉毒素的降解效果Isolation、screeningandAflatoxinB1-degradingofthestrainantagonisttoAspergillusflavusApplicant:HANYu-jieMajor:MicrobialandBiochemicalPharmacySupervisor:WUGuo-jiangZHUBao

6、-chengAbstractFeedintheprocessofproductionandprocessingandtransporteasilycontaminatedwithmold,moldcontaminationoffeeddestroythenutrientsandthemoldproducesthetoxinswhichaffectthesafetyandhealthofhumanbeingthroughthefoodchain.Thecommontoxinisaflatoxinwhichisstrongestandthemostwidespread

7、.Therearesomemethodtopreventaflatoxinwhicharephysicalmethod,chemicalmethodandbiologicalmethod.Itbecomesahotresearchindomesticandforeign.Inourexperiment,itusedtheplateconfrontationscreeningandrescreeninginhibitoryratemethodtoisolatedfromsoilandthemoldcontaminationofgrain.Usingthemorpho

8、logic