黑曲霉糖化酶淀粉结合结构域的亲和性及在马铃薯淀粉品质改良中应用研究

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1、分类号０７８学号２００６２１６０３１？—為音泉違勇义參博±学位论文黑曲霉糖化酶淀粉结合结构域的亲和性及在马铃著淀粉品质改良中应用研究张看峰？．．？Ｉ指导教师杨清教授季勤教授专业名称生物化学与分子生物学研究方向植物基因组学与基因工程．答辩曰期二〇—五年四月！．■Ｉ■＇」ＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥ乂ＦＦＩＮＩＴＹＯＦＧＬＵＣＯ乂ＭＹＬＡＳＥＳＴＡＲＣＨＢＩＮＤＩＮＧＤＯＭＡＩＮＩＮＡＳＰＥＲＧＩＬＬＵＳＡＮＤＩＴＳＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＩＮＰＯＴＡＴＯＳＴＡＲＣＨＱＵ

2、ＡＬＩＴＹＩＭＰＲＯＶＥＭＥＮＴＢｙＺｈａｎＹｕｎｆｅ田ｇｇＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐｙＰｒｏｆｅｓｓｏｒＹａｎｉｎａｎｄＰｒｏｆｅｓｓｏｒＪｉｉｎｇＱｇＱＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｊｇｇＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌ削ｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒ化ｅＤｅｇｒｅｅｏｆＰｈ．Ｄ．Ｃｏｍｌｅ化ｄｉｎ乂ｒ２０１５ｐｐ，ＣｏｍｍｅｎｃｅｍｅｎｔｉｎＡｐｒ，２０１５原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师

3、的指导下，独立进行研巧工作所取得的成果，。除文中己经注明引用的内容外本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果，均己在文中。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。７，＾学位论文作者：璋ｙ月《日（需亲笔倦名学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留，、使用学位论文的规定同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印。、缩印或扫描等复制手段保存和

4、汇编学位论文□解密后适用本授权书。，在本学位论文属于不保密出／保密年＂＂请在上方框内打Ｖ（）￣＇Ｉ＞厂年＾＾日学位论文作者需亲笔签名：＞月（）心导师需亲笔）签名：（ｒ月Ｉ（皆讀目录目录ｉｒ要ＩＡＢＳＴＡＲＣＴＶ符号与缩略语词汇表ＩＸ前胃ＸＩ一第：ｔ文献综述１１马铃薑的概述１２淀粉的结构与理化性质２２．１淀粉的结构２２．２淀粉的理化性质４３淀粉的合成５３．１胆藏淀粉的生物合成途径６３．２支链淀粉的合成模型８．３３参与淀粉合成的主要酶９４马铃墓淀粉的遗传改良１１４．１提高马铃

5、馨淀粉的含量１１４．２马铃墓淀粉品质的遗传改良１３５淀粉结合结构域的研巧１６５．１碳水化合物结合结构域（ＣＢＭ）１６５．２淀粉结合结构域（ＳＢＤ）的分类１６５．３ＳＢＤ的结构２１５．４ＳＢＤ的结合位点２２５．５ＳＢＤ的功能与恃性２３５乂ＳＢＤ的应用２４５－．７ＳＢＤ平台技术２５槪部２７第二章串联重复的ＧＡＳＢＤＳ蛋白与淀粉结合亲和力２７１材料与方法２７１．１实验材料２７１１．１２７．菌株与质粒１黑曲霉糖化酶淀粉结合结构域的亲和性及在马铃害淀粉品质改良中应用研究１丄２酶与试剂２８

6、１．１３培养基２８．１．２２８实验方法）２８１．２．１黑曲霉ＧＡＳ公￡基因的克隆１２２大肠杆菌表达质粒的构建２９．．２３ＧＡＳＢＤ２３１１．．蛋白可溶性表达条件的优化２４可ＧＡＳＢＤ３３１．．溶性重组蛋白（ｓ）的诱导表达与分析ＳＢＤ３３１．２．５重组蛋白ＧＡ（ｓ）的纯化与分析１２６ＧＡＳＢＤｓ重姐蛋白与玉米淀粉结合的定性分析３３．．（）１２７ＧＡＳＢＤ３４．．（ｓ）重组蛋白的结合曲线１２８ＧＡＳＢ３４．．Ｄｓ重姐蛋白的吸附等温曲线（）２．结果与分析３５２．１黑曲霉Ｇ４郎Ｚ）基因的克隆３５２．２鮮城公基因

7、的同源性分析３５２．３大肠杆菌表达质粒的构建３７２．４重组蛋白ＧＡＳＢＤ２可溶性表达条件的确定４２２．５重组蛋白ＧＡＳＢＤ（ｓ）的诱导表达与分析４５２６ＳＢＤ４６．重组蛋白ＧＡ（ｓ）的纯化与分析２．７ＧＡＳＢＤ（ｓ）重姐蛋白与淀粉结合的定性分析４７２．８ＧＡＳＢＤｓ重组蛋白的结合曲线４８（）２９ＧＡＳ９．ＢＤ（ｓ）重组蛋白的吸附等温曲线４３職