结核与非结核分枝杆菌感染者血浆差异表达microrna的初步筛选与功能分析

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1、中图分类号：R183.3论文编号：HBLG2015-020UDC：密级：公开硕士学位论文结核与非结核分枝杆菌感染者血浆差异表达microRNA的初步筛选与功能分析作者姓名：高丽学科名称：公共卫生与预防医学研究方向：流行病与卫生统计学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月16日申请学位类别：医学硕士导师姓名：冯福民教授单位：华北理工大学公共卫生学院论文评阅人：单位：单位：论文答辩日期：2015年6月8日答辩委员会主席：刘殿武教授关键词：microRNA；NTM；MTB；基因芯片；功能分析唐山华北理工大学2015年6月PreliminaryS

2、creeningandFunctionAnalysisofmicroRNAinPlasmainPatientsInfectedwithNon-tuberculosisMycobacteriaandMycobacteriumTuberculosisDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicineByGaoLi(PublicHealthandPreven

3、tiveMedicine)Supervisor:ProfessorFengFuminJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定

4、提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。论文密级：□公开；□保密（至年月）(保密论文在解密后遵守此规定)。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的结核分枝杆菌（tuberculosismycobacterium,MTB）与非结核分枝杆菌（non-tuberculosismycobacterium,NTM）感染肺部疾病患者相比，NTM感染的肺部疾病患者血浆中差异表达microRNA（miRNA）的筛选及验证，并对差异表达miR

5、NA调控的靶基因及其参与的生物学功能进行分析。方法1研究对象选择：收集唐山市第四医院与石家庄第五医院2013.10-2014.10期间就诊的符合要求的NTM感染肺部疾病患者19例作为NTM组，MTB感染肺部疾病患者37例作为MTB组，取得研究对象知情同意后取其血浆标本并进行一般情况调查。从每组中各选取6例研究对象用于芯片筛选；其余研究对象用于Real-timePCR（RT-qPCR）验证。2NTM感染患者血浆中差异表达miRNA筛选及验证：（1）采用TaqMan低密度芯片技术检测miRNA的表达水平，根据校正后的两个样本间杂交信号强度的比值进行选择,比值大于1

6、.8表示差异表达上调，小于0.7表示差异表达下调。（2）采用RT-qPCR技术验证芯片筛选结果，两组间miRNA表达水平的比较采用两独立样本的t检验，以P＜0.05为统计学显著性差异标准。两组差异表达miRNA的相对表达量用2-△△Ct方法进行计算，2-△△Ct大于1表示表达上调，2-△△Ct小于1表示表达下调。3差异表达miRNA靶基因的预测及功能分析：通过miRanda、TargetScan和miRwalk三个数据库联合对NTM组差异表达miRNA的靶基因进行预测。基于GeneOntology数据库对靶基因进行功能预测，利用Fisher精确检验的统计方法计

7、算每个GO中靶基因的显著性，以P-value＜0.05作为判断标准。4统计学分析方法：对研究对象一般情况采用SPSS17.0进行统计分析，其中年龄变量采用两独立样本t检验，分类资料采用两独立样本2检验，以P＜0.05为统计学显著性差异标准。结果1NTM组差异表达miRNA筛选及RT-qPCR验证：（1）NTM组差异表达miRNA筛选：根据以下三个标准，本研究共筛选出差异表达miRNA11个，包括上调miRNA8个，分别为hsa-miR-26a，hsa-miR-24，hsa-miR-222，hsa-miR-191，hsa-miR-155，hsa-miR-126

8、，hsa-miR-122，hsa-le