转asgna拟南芥鉴定、抗虫性分析和对棉花的遗传转化

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1、分类号Ｑ９４３．２密级学号１２２０８９气ｍｍｍ硕±学位论文（学术型）题目转＾＾技＾心拟南芥鉴定、抗虫性分析和对棉花的遗传转化作者田莉莉指导教师俞嘉宁教授－级学科名称二级学科名称生物化学与分子生奶学提交日期二０—五年五月学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行研巧工作所取得的研巧成果．尽我所知，除文中邑经注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。

2、对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。一本学位论文若有不实或者侵犯他人权利的，本人愿意承担切相关的法律责任。、１作者签名：、吝车Ｉ孚日親＞〇］：年《月日／Ｉ学位论文知识产权及使用授权声明书本人在导师指导下所完成的学位论文及相关成果，知识产极归属陕西师范大学。本人完全了解陕西师范大学有关保存、使用学位论文的规叛允许本论文被査闽和借阅，学校有巧保留学俭论文并向国家有关部口或化构送交论文的纸质版＾和电子版，有权将本论文的全部或部分内容编入有关巧据库进行检索，可｜２１采用任何复制手段保存和汇

3、编本论文，。本人保证毕业离校后发表本论文或使用本论文成果时署名单位仍为陕西师范大学。保密论文解密后适用本声明？１作者签名：＞曰親年月曰（（Ｉ摘要棉花是世界上重要的经济作物，在纺织工业中担任重要的角色。但棉花易遭受各种病虫害的侵染、咬懂，因此抗虫棉的培育己引起了各国普遍的关注。我国常见的抗虫棉主要是针对抗棉铃虫的转基因棉，而近年来，吸食汁液的昆虫，如；吻虫舶ｊｇｏｓｓｙｐ巧，小叶蜡庇ｖｏｙｔｏｎ句，粉風盲椿象？户口ｎｔｏ伽ｍ舶一，己成为了棉铃虫之后的又类棉花主要的害虫，因此培育抗吸食（句汁液害虫的棉花有重要意义，而基因工

4、程技术的发展为培育新型抗虫棉提供了有一效的技术手段。本课题利用本实验室前期人工合成的个新的心（ａｒｔｔｉｆｉｃａｌｓｙｎｉ也ｓｉｓｅｄＧａｌａｎｔｈｕｓｎａｖａｌｉｓａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ），作为抗虫基因，通过转基因拟南芥及瞬时表达技术检测了该基因的抗虫性，在此基础上，通过基因工程技术转入棉花中，Ｌｉ：ｌ期培育新的抗轉虫的转基因棉花。具体实验结果如下：１）对本课题組前期培育的５个转基因的拟南芥株系，经抗性筛选获得纯系植株，；通过转录水平及蛋白表达检测表明５个转基因株系都有ＡＳＧＮＡ－８４／ｌ的表赵在根、茎、叶、花中表达量平均为５

5、２义２９６７５．ｎｇＯＯｇ鲜重。２）对５个转乂祐Ｗ４株系进行抗虫性分析，结果显示转基因植株对呀虫的存活率，产子率化没生长发育均有影响。与对照组相比，转基因拟南芥上的巧虫存－－－５５．０％８０．７０％６７５０８２．５０％０２０．３活率下降，产仔率下降．％；喊虫体宽减少．０６ｍｍ，呀虫逃逸数量也显著高于野生型拟南芥。上述结果显示乂ＳＧＭ４对呀虫有较好的抗性。３）对５个转心ＧＷ４株系进行抗小菜蛾ｆ／Ｗｅ侃沁Ｗｅ化０分析，Ｗ野生型拟（如南芥上小菜蛾为对照，与对照组相比，转基因拟南芥上的小菜蛾存活率无明显差＋异，但是转基因拟南芥

6、上生长的小菜蛾平均体重每只减少８．８４０．％ｍ实验ｇ；Ｗ小菜蛾数目为对照，结虽率也低于对照组；另外观察到转基因拟南芥上生长的小一菜蛾有少数不吐丝直接化蛹现象。表明对祖嚼式害虫也有定抗性。－－－４）－－；３５ｓＡＳＧＮＡｅＧＦＰｚ２１１和％ＳＡＳＧＮＡＡＲＴ２７构建了瞬时表达载体ｐｐＰ，分别转入农杆菌ＬＢＡ４４０４中，利用棉花子叶瞬时表达系统进行瞬时表达ＡＳＧＮＡ－ｅＧＦＰＲＮＡ旅Ｗ４和ｅＧＦ户及观察融合蛋白和，通过水平检测Ｊ绿色茨光；表达ＡＳＧＮＡ蛋白，进行ＲＮＡ水平检测。表明棉花子叶瞬时表达系统可在转录水平及蛋白水平表达＾

7、５访心基因。５）利用上述瞬时表达系统进行抗虫性分析＜，１＾１饲喂转空载体的同期生长的棉花子叶为对照，瞬时表达ＡＳＧＮＡ的棉花子叶叶片上，巧虫存活率下降Ｉ－４５－６８５％％照组。上述实．０％５２．５％，产仔率下降．８２．５，而好虫逃逸数量高于对验数据表明，棉花子叶瞬时表达的ＡＳＧＮＡ蛋白具有较好的抗呀虫效果。６－－）构建转仿心基因棉花表达载体３巧ＡＳＧＮＡＰＡＲＴ２７，通过农杆菌侵染棉花下胚轴再生愈伤组织的方法，将其转入棉花细胞，经棉花植物组织培养，Ｋａｎａ抗性筛选，多次继代培养盾，获得Ｔｏ代转基因棉花，经初步分子鉴定，为转的

8、棉花植株。ＳＧＮＡ关键词：Ａ，凝集