羊膜移植治疗犬角膜损伤的实验研究

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2、９王亨副教授．江苏扬．２２．ｒ＼■扬州女学州；惦床兽医学；．、申请学位级别；硕壬学科专业名称论文提交日期２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６遇＿：京；、三马＊６月大学学位授予日期；２０１５年Ｔ学位授予单化扬Ｊ＇４答辩委员会主席；巧加法教授．＿；；刘宗平教授论文评阅人＿擎＼Ｖ＇，餐八．＾心事論－－、换＇；２０－兰故鸿１５年６月吟＞違－－＊＇於璧黃。．Ｗ一满＿＾群＇＾？．艮－：；方立；戸巧游：：啤．豕；羊膜移植治疗犬角膜损伤的实验研究Ｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｆａｍｎｉｏｔｉｃｍｅｍｂ

3、ｒａｎｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｆｏｒｐｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃａｎｉｎｅｃｏｍｅａｌｉｎｕｒｊｙ研究生：王艳导师：李建基教授王号别教授专业：临床兽医学＾ｐａｐｄ）资助项目：江苏高校优势学科建设工程资助项目扬州大学兽医学院临床兽医学系２０１５年６月王艳羊膜移植治疗犬角膜损伤的实验研究１＿羊膜移植治巧犬角膜损伤的实验硏究摘要犬角膜损伤是临床常见的眼科疾病，且致盲率较高。羊膜免疫源性低，Ｗ其优越的理化特性而成为理想的生物移植材料，。因此为了探索犬角膜损伤的高效疗法，本试验首先建立了犬角膜碱烧伤疾病

4、模型，然后采用羊膜移植术对其进行治疗，并观察病犬眼睛的临－床症状ＯＵＶＥＧＦ和ＴＧＦ－ｌ、角膜组织学变化及相关细胞因子ＴＮＦｐ的基因相对表达量情况。选取健康成年比格犬６只，将直径６ｍｍ的圆形滤纸片用１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液浸湿，置于角膜中央１ｍｉｎ，然后立即用生理盐水冲洗眼巧表面，制得犬角膜碱烧伤疾病模型。取’一一剖腹产犬胎儿羊膜，Ｃ保存。，制备犬羊膜片置于ＤＭＥＭ甘油液中，８０本试验用同条犬的左眼作为对照组，仅进行碱烧伤；右眼为试验组，碱烧伤后进行羊膜移植。术后每日观察犬角膜水肿、角膜新生血管和眼分泌物等情况，于术后３、７、１４、２１、２８和％

5、ｄ测量眼内压和泪液量，并对角膜混浊、新生血管及上皮修复情况进行评分后３５ｄ采；术集一Ｍ，２，犬角膜组织将其分成份份用于病理组织学观察，组织切片用ＨＥ染色及ａｓｓｏｎ一Ｈ色染色－－；另份用于巧光定量ＰＣ民实验ａ、ＶＥＧＦ和ＴＧＦ，检测ＴＮＦｐｌ的基因相对表达量。试验结果如下：（１）术后两组犬的角膜都出现不同程度的水肿和眼分泌物增多症状，试验组犬眼球表面的羊膜植片较平整，５至第１，羊膜于１周内溶解术后ｄ角膜缘出现新生血管芽，６ｄ时眼分泌物减少并恢复到正常水平，；而对照姐犬眼术后５ｄ角膜缘出现刷状的新生血管至第２８一ｄ时仍有２只眼睛有较多的分

6、泌物，在第６ｄ时有只眼的角膜出现穿孔。至术后％ｄ时，试验组犬眼在角膜混浊程度及血管新生方面明湿优于对照组（尸＜化０５），第２１ｄＰ＜００５）时两组犬角膜英光素染色出现显著差异（．，试验组犬角膜着色明显轻于对照組，至术后３５ｄ时试验组犬角膜巧光素着色不明显，对照组犬角膜呈浅着色。术后１４ｄ，试验，组犬眼的眼巧压及泪液量指标升高但处于正常生理范围之内；对照组犬眼的眼内压极显著降低（戶＜０．０１），泪液量显著减少（户＜０．０５）；至第３５ｄ时两组大眼的眼内压及泪液量均恢复至正常水平，但对照组处于正常生理范围的下限。（２）术后３５ｄ，犬角膜病理组织

7、学切片显示：对照组犬角膜有较多的炎性细胞和新生血管，血管腔内有成熟红细胞，成纤维细胞肥大，基底细胞肿胀且间隙增大，胶原纤维ｎ扬州火学硕±学位论文，，排列棄乱；试验組犬角膜炎性细胞和新生血管相对较少成纤维细胞扁平胶原纤维排列相对较整齐。－－（３）ｄ，ＴＮＦａＶＥＧＦ和ＴＧＦｌ术后％试验组犬角膜组织中、ｐ的基因相对表达量极显著低于对照组＜０．００。、由上述试验结果可知，羊膜具有抑制炎症反应抑制血管新生和媳痕的形成、促进角一膜损伤愈合的重要作用，对