玉米赤霉烯酮诱发睾丸间质肿瘤机制的体外研究

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2、＇’．论文提交円期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月名三三学位授予单位＝扬州大学学位授予日期：２０１５年６月答辩委员会主席：戴有理研究员．．：卖＇．．－．嚷朱吟，－《擊＇、拆占＇呼＾－皆．＾：乂’．＇－＇■．务＇２０‘＾．１５年６月－４＾告＇ｒ於一、一少一．：＇．、．：耗＾＇Ｖ洁，＾－．．．．；二．＞：：：；，式，如巧＇―■＇心次六－＇＇？．．；、；，■＞若．甲義／一户方＇＇、．‘．＇．＾。．＾、．＇’＇＾八‘＾＾－一＾：＾《．＊：．常；尤终參皆／＾乃．巧玉米赤霉絲酬诱发睾丸

3、间质肿瘤机制的体外研究Ｓ－ｔｕｄｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅｉｎｄｕｃｅｋｓｔｉｃｕｌａｒｙｓｔｒｏｍａｌｔｕｍｏｒｉｎｖｉｔｒｏ研究生：黄沁怡导师；卞建春教授学科；临床兽医学Ｍ．Ｓ．Ｃａｎｄｉｄａｔｅ：ｉｎｉＨｕａｎＱｙｇＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＪｉａｎｃｈｕｎＢｉａｎｐ扬州大学兽医学院临床兽医学专业２０巧年６月黄沁怡＝玉米赤霉婿刚诱发睾丸间质肿瘤机制的体外研巧［中文摘要玉米赤霉蹄厕（Ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ，ＺＥＡ）是存在于谷物、啤酒、牛奶等食品中的类雌激素霉菌毒素，可

4、严重影响动物及人类的健康。研究发现ＺＥＡ不仅具有生殖毒性、肝毒性、遗传毒性，ＺＥＡ诱发睾、免疫毒性，还可引起动物睾丸间质肿瘤的发生但关于丸间质肿瘤的机制目前尚不明确。本实验Ｗ小鼠睾丸间质细胞（ＴＭ３细胞）为材料，研究了低浓度的ＺＥＡ暴露对ＴＭ３细胞的细胞增殖活力、细胞调亡、细胞周期及其相关调控蛋白的影响，ＤＮＡ损伤及原癌，，、抑癌基因的影响细胞间隙连接通讯及其连接蛋白的影响揭示ＺＥＡ诱发睾丸间质肿瘤的机制。主要研究内容如下：１．ＺＥＡ对ＴＭ３细胞増殖、细胞周期及调亡的影响。不同浓度的ＺＥＡ（０、５、１０、２０峭／Ｌ），染毒ＴＭ３细胞７２ｈ，应用ＭＴＴ法

5、检测沈Ａ染毒后对ＴＭ３细胞增殖活力的影响；－ＦＡｎｎｅｘｉｎＶＩＴＣ／ＰＩ双巧光染料对细胞进行染色，流式细胞仪检测ＺＥＡ染毒ＴＭ３细胞调亡情况，同时通过ＰＩ羡光染色法检测细胞周期的变化；通过免疫印迪法（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ）检－ｉｔ调控蛋白ＣｃｌｉｎＤｌｄｋ４Ｂ２巧，ｃｌ基因家族成员的表达情况。结果显示，ｊ调ｙ及其激酶ＣＺＥＡＴＭ３－低浓度对细胞的增殖具有促进作用，且存在剂量效应关系，在ＺＥＡ染毒浓度＾＜为２０ｉ／Ｌ时，ＴＭ３细胞的相对增殖（ｉ０．０５）ＺＥＡ染毒后，分布于Ｇ１／Ｇ０＾ｇ活力明显提高；期的ＴＭ３细胞量逐渐减少，开始向Ｓ期和Ｇ２期进行转化

6、，而细胞周期调控蛋白ＣｙｃｌｉｎＤｌ及其激酶Ｑｉｋ４蛋白表达量随ＺＥＡ染毒浓度的升高而呈上升庭势；细胞调亡检测结果显示，１０、２０／ＬＺＥＡ染毒后ＴＭ３细胞的调亡率极显著下降（尸＜０．０１）惦，但２０帖／ＬＺＥＡ染毒组较１０／ＬＺＥＡ染毒组调ｔ率略有上升（Ｐ＞０．０５）与对照组比较，各染毒组调亡调控蛋白帖；？－＜Ｂａｘ／Ｂｃ２７．）ｌ灰度值比值均显著降低（００５。２ＺＥＡＴＭ３ＤＮＡ．对细跑损伤及原癌、抑痛基因的调控作用。ＺＥＡ染毒ＴＭ３细胞７２ｈｅｓｔｅｒｎｌｏｔＨＡＸ的蛋白表达水平，同时检测原癌基因，应用ＷＢ检测磯酸化沮蛋白丫２－Ｍ－Ｆｏ－ＡＸｃｃ

7、、ｃｓ、ｃＪｕｎ，抑癌基因５３、ＰＴＥＮ的蛋白表达水平Ｈ２ｙｐ；免疫巧光法检测丫巧光焦点的形成倩况。结果显示，ＴＭ３细胞内形成的Ｈ２ＡＸ英光焦点数量及形成英光ｙ焦点的细胞数量都随着ＺＥＡ染毒浓度的升高而增加，２０／ＬＺＥＡ染毒组只有％帖．２１％的细胞未形成巧光焦点，其余细胞均有不同程度的ＤＮＡ损伤；与对照组比较，各染毒组丫Ｈ２ＡＸ蛋＊＜－－－白表达量均显著升高（／０．０５）ＺＥＡ染毒Ｍ；随着浓度的升高，原癌基因ｃｙｃ、ｃＦｏｓ、ｃＪｕｎ