熊果酸对原代肝星状细胞活化过程中nox-hedgehog信号网络的影响

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512375南昌大学硕士研究生学位论文熊果酸对原代肝星状细胞活化过程中NOX-Hedgehog信号网络的影响EffectsofursolicacidontheNOX-HhsignalpathwayinducedbyTGF-βduringtheactivationofQ-HSC陈标培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：朱萱教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科学（消化）论文答辩日期：2015年6月答辩委员会主席：评阅人：2015年6月I一、

2、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电

3、子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_m

4、ail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要背景：肝纤维化是由多种病因所引起的慢性肝脏疾病的共同病理过程，其主要特征为细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）增生与降解失衡，导致肝脏内ECM过度沉积。活化的肝星状细胞（hepaticstellatecells,HSCs）是ECM产生的主要细胞来源，因此，原代肝星状细胞（Quiescenthepaticstellatecells,Q-HSCs）的激活、增殖并转化为成纤维细胞样肝星状细胞（myofibrob

5、lastichepaticstellatecells,MF-HSCs）在肝纤维化发生发展过程中起着关键性作用。Hedgehog（Hh）信号通路在肝脏胚胎发育以及成熟肝脏的损伤修复过程发挥着重要的作用。越来越多研究表明，Hh信号通路的持续激活促进Q-HSC转化为MF-HSC，进而促进肝纤维化发展。NADPH氧化酶（NADPHoxidase，NOX）参与介导一系列促纤维化信号通路，有学者研究发现，NOX亚基Rac1参与了对Hh信号通路的调控，它能激活Hh通路，进而促使Q-HSC激活转化为MF-HSC。我们前期研

6、究发现熊果酸能显著抑制瘦素诱导的HSC-T6中NOX亚基Rac1蛋白表达，进而抑制Hh信号通路活性。基于以上研究及前期研究成果，本研究将进一步以原代HSC为研究对象，观察Q-HSC转化过程中NOX对Hh信号通路的调控作用及熊果酸对该信号网络的的影响。目的：观察Q-HSC活化转化过程中NOX对Hh信号通路的调控作用，明确熊果酸对NOX-Hh信号网络的影响及机制。方法：取分离提取长至第5天的原代肝星状细胞，随机分成以下各组：正常对照组；熊果酸组（40μM）；TGF-β组（5μg/L）；熊果酸干预组（TGF-β+

7、熊果酸）；DPI干预组（TGF-β+DPI10μM）。干预组分别给予熊果酸和DPI（NOX特异性抑制剂）预处理半小时之后再加入TGF-β，各组经相应药物作用12h后，提取细胞总RNA，用qRT-PCR法检测药物处理后HSC对I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA表达以及Hh信号通路中Shh、Smo、Gli2和NOX亚基Rac1II摘要的mRNA表达；药物作用24小时后，提取每组HSC总蛋白，采用Westernblotting分别检测Rac1、Shh、Smo、Gli2及α-SMA蛋白表达。结果：1

8、.熊果酸对Q-HSC活化过程中I型胶原mRNA、α-SMAmRNA表达的影响TGF-β刺激原代HSC12h后，I型胶原和α-SMAmRNA的表达比空白对照组明显增加（P<0.01）；熊果酸自身对照组I型胶原和α-SMAmRNA表达明显低于空白对照组（P<0.05；P<0.01）；在TGF-β刺激原代HSC之前加入熊果酸进行干预后其I型胶原和α-SMAmRNA水平较TGF-β刺激组显著降低（P<0.01），并且与N