熊果酸对nadph氧化酶亚基在静止型肝星状细胞活化过程中表达及功能的影响

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512402南昌大学硕士研究生学位论文熊果酸对NADPH氧化酶亚基在静止型肝星状细胞活化过程中表达及功能的影响EffectsofUrsolicacidontheexpressionandfuctionofNADPHoxidasesubunitsduringtheactivationofquiescentHSC余珊珊培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：朱萱教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科学（消化）论文答辩日期：2015年6月答辩委员会主席：评阅人：2015年6月一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学

2、位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用

3、影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要背景：肝纤维化由各种慢性肝损伤引起的肝脏过度修复反应造成，主要以I型胶原为主的细胞外基质（extra

4、cellularmatrix,ECM）在肝脏内过度沉积为特征。活化的肝星状细胞（hepaticstellatecells,HSCs）是ECM的主要来源，所以静止型HSC向活化型HSC激活、转化的过程是肝纤维化的中心事件。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NADPHoxidase,NOX）及其产生的活性氧簇（reactiveoxygenspecies,ROS）诱导的氧化应激被证实在HSC的激活、转化及肝纤维化发病及进展中具有十分重要的作用。我们前期研发现中药单体熊果酸能够显著抑制细胞因子瘦素、AngII及PDGF诱导的活化型HSCs内NOX亚基的表达、NOX活性、NOX来源的RO

5、S产生及其NOX下游PI3K/Akt、p38MAPK信号通路的激活，从而抑制活化型HSCs的增殖、并诱导其凋亡，发挥抗肝纤维化作用。那么熊果酸干预是否也能够通过下调NOX的表达而抑制静止型HSC的活化，早期预防肝纤维化的发生，目前尚未阐明。本课题将继续在前期研究的基础上，以健康大鼠原代静止型肝星状细胞为研究对象，以TGF-β为促HSC活化因子，探讨熊果酸对静止型HSC活化过程中NOX亚基表达的影响及该影响与静止型HSC激活、转化之间的关系，进一步探讨熊果酸抗肝纤维化的作用机制。目的：探讨熊果酸对大鼠静止型HSC活化过程中NOX亚基表达的影响，及该影响与静止型HSC激活、转化之

6、间的关系。方法：采用肝脏原位灌注及密度梯度离心法从健康SD大鼠体内分离提取原代静止型HSCs，待原代HSCs自然培养至第5天时将细胞随机分成五组并加用不同药物进行处理：空白对照组（control组，细胞自然培养活化），熊果酸组（UA组，40μM），TGF-β组（5μg/L），熊果酸干预组（UA+TGF-β组，UA40μM+TGF-β5μg/L），DPI干预组（DPI+TGF-Β组，DPI10μM+TGF-β5μg/L）。原代HSCsphoxphox经加药处理24h后提取细胞总蛋白，Westernblot检测NOX亚基gp91、p22、phoxp67及HSC活化特异性标志物α-

7、SMA的蛋白表达水平。药物作用12h后采用IphoxRT-qPCR检测NOX亚基Rac1、p22及I型胶原的mRNA表达。结果：1熊果酸对静止型HSC活化过程中NOX亚基蛋白表达的影响phox1.1熊果酸对静止型HSC活化过程中gp91蛋白表达的影响phoxTGF-β刺激原代HSCs24h后gp91蛋白水平明显高于空白对照组phox（P<0.01）；熊果酸组NOX亚基gp91蛋白表达明显低于空白对照组（P<0.05）；phox在TGF-β刺激原代HSCs之前加入熊果酸进行干预后gp91蛋白水平较单纯ph