配对盒基因2（pax2）对食管癌细胞生物学功能的影响及机制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY博士学位论文论文题目配对盒基因2(PAX2)对食管癌细胞生物学功能的影响及机制研究研究生姓名宦坚田野指导教师姓名肿瘤学专业名称消化系统肿瘤研究方向2015年3月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：[h日期：苏州大学学

2、位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年__月解密后适用本规定。非涉密论文口）论文作者签名：导师签名：配对盒基因2（PAX2）对食管癌细胞生物

3、学功能的影响及机制研究中文摘要中文摘要第一部分：食管鳞癌组织中PAX2因子的表达及其临床意义目的研究配对基因盒2（PAX2）在食管鳞癌(ESCC)组织、癌旁组织及正常食管上皮组织中的表达。方法通过免疫组织化学荧光染色方法检测15例正常食管组织、52例食管鳞癌癌旁组织和120例食管鳞癌组织中PAX2的蛋白表达水平，并观察其与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期及淋巴管浸润的关系。结果在人食管鳞癌组织中PAX2蛋白表达水平显著高于对应癌旁组织及正常食管组织（P=0.003和P=0.002）。PAX2蛋白表达水平与TNM分期相关（P=0.001），PAX

4、2表达水平在37例TNMIII和IV期患者中明显高于67例I和II期患者，差异有统计学意义（1.353±0.088和1.933±0.133，P<0.0001）；同样，PAX2的表达与淋巴结转移（P=0.019）和淋巴管浸润（P=0.005）相关，差异有统计学意义。而PAX2的表达与患者年龄、性别、生物学分级无明显相关性。结论PAX2在食管鳞癌组织中的表达明显高于对应癌旁组织及正常食管组织，且与TNM分期、淋巴结或转移及淋巴管浸润具有显著相关性。【关键词】食管鳞状细胞癌（ESCC）；PAX2；免疫组织化学；第二部分：PAX2在食管癌中的生物学功能研究目的研究配对基因盒2（P

5、AX2）在食管鳞癌细胞株TE-1和Eca-109细胞中的生物学功能。方法构建PAX2过表达载体并验证上述载体和靶向PAX2的siRNA。通过MTT与克隆形成实验检测PAX2对食管癌细胞生长增殖的影响；通过Transwell小室模型检测PAX2对食管癌细胞侵袭能力的影响；通过克隆形成实验检测PAX2对放射敏感性的影响；通过Westernblot检测相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达。结果食管癌TE-1和Eca-109细胞转染PAX2过表达载体后，细胞中PAX2I中文摘要配对盒基因2（PAX2）对食管癌细胞生物学功能的影响及机制研究蛋白水平明显提高；细胞转染靶向PAX2的s

6、iRNA后，PAX2的水平显著低于对照组。细胞存活实验表明：PAX2过表达会抑制细胞的生长及克隆形成；而敲低PAX2的表达则能加速细胞的生长与克隆形成。Transwell实验表明，PAX2过表达促进食管癌细胞的侵袭，敲低PAX2水平则抑制细胞的侵袭。PAX2过表达能诱导MMP2和MMP9的表达水平。抑制PAX2的表达可提高食管癌细胞的放射敏感性。结论PAX2具有抑制食管癌增殖、促进食管癌侵袭及放射抗拒性的功能。【关键词】食管鳞状细胞癌（ESCC）；PAX2；生长增殖；侵袭；放射敏感性第三部分：PAX2在食管癌中的转录调控机制研究目的研究配对基因盒2（PAX2）在食管癌细胞

7、株中的调控网络及下游靶基因，全面揭示PAX2的调控网络。方法TE-1细胞过表达PAX2后采用表达谱芯片检测与转染对照载体的细胞mRNA表达谱的变化。克隆不同长度的白介素5（IL-5）基因的启动子到pGL3-Basic报告基因载体上。采用荧光素酶实验检测PAX2对IL-5启动子转录活性的影响。采用RT-PCR检测PAX2对内源性IL-5的转录激活作用。采用染色质免疫共沉淀（ChIP）检测PAX2与IL-5启动子DNA的直接结合。在组织样品中检测PAX2与IL-5mRNA的相关性。结果食管癌TE-1细胞转染PAX2过表达载体后有数