PPARα和YY1调控HO1对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究

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1、硕士专业学位论文论文题目PPARα和YY1调控HO-1对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究罗居东研究生姓名曹建平指导教师姓名放射医学专业名称肿瘤放疗生物学研究方向2014年5月论文提交日期IIPPARα和YY1调控HO-1对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究中文摘要中文摘要第一部分：PPARα对EGCG和电离辐射敏感性的影响及机制研究目的研究PPARα活化对表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)和电离辐射敏感性的影响及其机制。方法首先利用CCK-8试剂盒检测细胞存活率；分别采用WesternBlotting和real-timePCR检测蛋白质和m

2、RNA表达水平；采用PPARα的特异性激动剂和特异性拮抗剂来改变PPARα的表达；应用荧光素酶报告基因系统及染色质免疫共沉淀研究PPARα对血红素加氧酶-1(HO-1)的调控。采用克隆形成实验检测PPARα活化对肿瘤细胞放射敏感性的影响；采用表达谱芯片检测PPARα活化增加肿瘤细胞放射敏感性的机制。结果随着EGCG浓度的增加，PANC1细胞和A2780细胞的存活率逐渐下降。当EGCG处理肿瘤细胞后，PPARα蛋白水平会随着EGCG剂量的提高而增加。PPARα的特异性激动剂—氯贝特能增加胰腺癌PANC1和卵巢癌A2780细胞对EGCG的敏感性，其

3、机制是氯贝特能够抑制细胞保护性HO-1的诱导。荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀实验(CHIP)表明，活化的PPARα能结合到启动子上的PPAR结合元件(PPARE)上并抑制HO-1的表达。结论本研究表明EGCG能诱导肿瘤细胞中PPARα的表达，PPARα活化能够在转录水平上抑制HO-1的表达，从而增加肿瘤细胞对EGCG敏感性。PPARα的特异性激动剂氯贝特联合电离辐射可显著增加胰腺癌细胞的放射敏感性。表达谱芯片表明氯贝特主要通过影响多个受体介导的信号通路。C18orf4、CDH5等相关基因参与了这一过程。PPARα的特异性激动剂氯贝特联合

4、EGCG或电离辐射为临床肿瘤治疗提供了一个新方案。关键词：过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα)；表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)；电离辐射；血红素加氧酶-1(HO-1)I中文摘要PPARα和YY1调控HO-1对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究第二部分：YingYang1在食管癌中的表达及功能研究目的研究YY1在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管鳞癌发展过程中的作用。方法(1)采用实时定量PCR，检测24例正常食管组织样本和60例食管鳞癌组织标本中YY1的mRNA的表达水平；通过免疫组化，检测102例食管鳞癌组织、52例食管

5、癌旁组织和15例正常食管组织中YY1的蛋白水平。(2)构建YY1基因过表达载体和基因沉默载体，将两种载体转染人食管鳞癌TE-1细胞株，挑选稳定株，通过实时定量PCR技术检测YY1mRNA表达情况；通过WesternBlot检测YY1蛋白表达情况；对于转染YY1过表达载体或基因沉默质粒的TE-1细胞株，采用MTT法测定细胞的生长，细胞照射后，采用显微镜进行克隆形成率的分析以及对辐射敏感性的影响。(3)采用WesternBlot、荧光素酶报告基因检测YY1对HO-1的调控作用；通过免疫组化检测YY1与HO-1的相关性；通过转染和感染重组腺病毒，检测

6、HO-1对食管癌细胞的影响。结果与正常的食管组织相比，人ESCC组织中的YY1mRNA表达水平和蛋白水平显著升高。设计构建了过表达载体pcDNA.3.1-YY1和基因沉默载体YY1-siRNA与阴性对照siRNA-NC，YY1过表达载体能增强YY1转录和翻译，siRNA载体能减弱YYI基因转录表达。稳定转染YY1过表达载体的TE-1细胞中的YY1基因转录和蛋白表达显著增强，稳定转染siRNA载体的细胞中YY1转录和翻译水平显著降低。YY1过表达载体转染细胞后，抑制TE-1细胞的生长和克隆团的形成，但增加了其辐射抗性。YY1过表达，ESCC组织或

7、细胞中的HO-1表达水平上调，YY1表达水平下降则HO-1减少。与对照组Ad-EGFP相比，转导Ad-HO-1，细胞生长并没有明显的改变，但是可以降低克隆团的大小。结论YY1在食管鳞癌组织中的表达水平明显高于正常组织，YY1通过调控HO-1抑制食管癌细胞生长增殖。关键词：YingYang1(YY1)；食管鳞癌；放射敏感性；HO-1作者：罗居东指导教师：曹建平IIPPARα和YY1调控HO-1对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究英文摘要Partone:PPARαactivationsensitizescancercellstoepigalloca

8、techin-3-gallate(EGCG)andionizingradiationABSTRACTObjective:Toinvestigateth