神经酰胺在酒精性肝病发病机制中作用的实验研究

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1、授予单位代码——10089学号或申请号20123128对妗(i科走SHebeiMedicalUniversity专业学位神经酰胺在酒精性肝病发病机制中作用的实验研究研究生：杨柳导师：周俊英教授专业：内科学二级学院：第三医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，

2、试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名:导师签章：二级学院领导盖章：只/f年3月•曰河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要...…………………………………………………………………3英文缩写...………

3、……………………………………………………………6研究论文神经酰胺在酒精性肝病发病机制中作用的实验研究前言………………………………………………….………….…7材料与方法…………………………………………….…….……..…7结果…………………………………………………….……………...14附图.......................................……………………….............................15附表……………………….....................

4、...............................................21讨论……………………………………………………………………23结论…………………………………………………………………....27参考文献………………………………………………........................27综述神经酰胺在酒精性肝病发病机制中的作用……................................31致谢……………………………………………….....................

5、....................42个人简历………………………………………………..................................43中文摘要神经酰胺在酒精性肝病发病机制中作用的实验研究摘要目的：酒精性肝病（alcoholicliverdisease，ALD）为长期大量酒精摄入或短期过量饮酒所致的肝脏疾病，其初期通常表现为脂肪肝，严重者可进展至脂肪性肝炎、肝纤维化甚至肝硬化。酒精引起肝功能损伤的具体机制尚不十分明确，目前有研究发现神经酰胺（ceramide）参与到其发病过程中。神经酰

6、胺属于鞘磷脂类，参与构成生物膜，并为鞘磷脂信号途径中重要的第二信使，能够激活多种蛋白激酶和蛋白磷酸酶如蛋白磷酸酶2A（proteinphosphatase2A，PP2A），调节凋亡、增殖等信号过程。乙醇激活酸性鞘磷脂酶（acidsphingomyelinase，ASMase）后，使神经酰胺生成增多，通过蛋白磷酸酶2A影响腺苷酸活化蛋白激酶（adenosinemonophosphateactivatedproteinkinase，AMPK），使活化的AMPK去磷酸化失活，进而影响到下游一系列脂代谢调节基因，导致

7、肝细胞内脂肪堆积。本研究采用酒精灌胃方式建立大鼠ALD模型，通过分子生物学方法探讨神经酰胺、酸性鞘磷脂酶及蛋白磷酸酶2A在酒精性肝病发病机制中的作用。方法：选择健康雄性Wistar大鼠50只，体重180-220g，经过正常喂养l周之后，随机分配10只作为正常对照组，其余大鼠作为模型组每日灌入酒精，并分别在第4周、8周、12周和16周末处死模型组大鼠10只、9只、8只和8只。取出大鼠肝脏后，用4％中性甲醛溶液固定一部分肝组织，经石蜡包埋后切片，行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色以观察

8、其病理改变，其余组织-80℃保存待用。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RealTime-quantitativePolymeraseChainReaction,RT-qPCR）法检测ASMase、PP2A的mRNA表达水平，免疫组化技术、Western-blot检测ASMase、PP2A的蛋白表达水平。高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）检测肝组织神经酰胺含量。结果：1肝脏组织病理学改变：4周大