线性dna结合细胞穿膜肽的花粉管通道法将atckx3导入玉米自交系的研究

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1、分类号ｉＳＩ密级；若知乂箸硕±研究生学位论文残性ＤＮＡ结合细胞穿膜化的花粉管通道法将ＡｔＣＫＸ３导入玉米自交系的研究专业：作物栽培学和耕作学研究方向：作物抗逆高产的理论与技术研究生：韩猛指导教师；邹华文教授吴忠义副研究员论文起止日期：２０１２年９月至２０１５年４月；Ｓ１密级分类号：戀秦為Ａ審硕±研究生学位论文线牲ＤＮＡ结合细胞穿膜肤的花粉管通道法将ＡｔＣＫＸ３导入玉米自交系的研究（圓专业；作物栽培学和耕作学研究方向；作物抗逆高产的理论与技术

2、研巧生：韩猛‘指导教师；邹华文教授吴忠义副研究员１５论文起止日期：２０１２年９月至２０年４月ＴｈｅｓＵｉｄｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｔＣＫＸ３ｉｎｔｏｙｍａｉｚｅｉｎｂｒｅｄｌｉｎｅｗｉｔｈｌｉ打ｅａｒＤＮＡｍｅｄｉａｔｅｄｂｃｅｌｌｅｎｅｌｒａｔｉｎｅｔｉｄｅｔｈｒｏｕｈｏｌｌｅｎｔｕｂｅｙｐｇｐｐｇｐＭａｏｒ：ＣｒｏＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａ打ｄＦａｒｍｉｎｊｐｇ－ＤｉｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳｌ：ｕｄ：Ｃｒｏｈｉｈｙｉｅｌｄｉｎｇｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅｔｈｅ

3、ｏｒａｎｄｙｐｇｙｔｅｃｈｎｉｕｅｓｑＧｒａｄｕａｔｅＳｔｕｄｅｎｔ：ｉＨａｎＭｅｎｇＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＡｉＺｏｕＨｏｕｗｅｎｐａｓｓｏｃｉａｔｅｒｅｓｅａｒｃｈｆｅｌｌｏｗＷｕＺｈｏｎｉｇｙＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＹａｎｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｇＳｅｔ；ｅｎｉｂｅｒ２０１２化Ａｒｉｌ２０１５ｐ，ｐ，０摘要干旱是制约农业生产和社会发展的重要问题。暂时或者永久性的干旱胁迫比。玉其他任何逆境因素更能限制作物的产量米是人类的主要粮食来源，

4、也是工业和作为饲料的一种重要资源。但同时玉米是对干旱胁迫很敏感。在干旱胁迫下玉，从而会降低玉米的产量和品质米正常的生长发育受到影响。而我国由于地形的不规则，许多地方都面临着干旱缺水的影响，所Ｗ利用转基因技术改善玉米品种来提高玉米的耐旱性能也越来越重要。根系是植物吸收水分和养分Ｗ及合成的重要器官，玉米的根系与其抗旱能力密切相关的生长情况对植物茎叶等地上部，它位及最终产量的形成具有很大的影响。所Ｗ我们选择与植物根系生长密切相关的ＣＫＸ基因进行玉米的转化，Ｗ期获得耐旱玉米品种。细胞分裂素氧化酶（ＣＫＸ）是细胞分裂素代谢

5、途径中的关键酶，它通过调节植物体内细胞分裂素的含量来调控植物的组织器官和根系的生长发育，从而能够促进植物根系的生长。本实验通过花粉管通道法将导入玉米１７８自交系，提高玉米的耐旱能力。通过Ｔｏ、ＴｉＷ及Ｔ２代进行草按麟除草剂筛选得到口２个纯合株系，然后将了２代纯合株系种植于基地抗旱棚中进行耐旱鉴定，选出耐旱能力比较强的８个转基因株系，并且测量它们的根系指标。对纯合株系通过ＰＣ民方法证明拥ｏｒ基因－－Ｗ及目的基因ＣＸＯ己经成功导入玉米基因组中。通过ＲＴＰＣ民和Ｂａｒｐａｔ试纸条检５视赃明１邸幻递因Ｗ及目的基因ＣＸＯ己经成

6、功地在玉米中得到表法。巧晚旱棚中转基因株系和１７８自交系的株高、叶面积，千粒重、单穗重等结实情况，结果表明转基因株系极显著好于１７８自交系。对８个转基因玉米株系和１７８自交系的苗、期根系相关指标根长侧根数等的测定，发现转基因玉米根系的相关数据要明显好于自交系玉米，并且都达到了显著差异或者极盘著差异Ｃ／Ｃ打基因过表，表明达的转基因纯合株系相比自交系Ｍ言，其耐旱能力有所提高。－ｆｌ构建ＰＧＭ说货Ｍ／Ｏａｒｉ／／化表达载体，并经过酶切验证和测序证明质粒载体构建正确，然后纯。ＰＣＲ方法获得所需要的线性目的基因化回收并且与

7、穿膜肤按质量比１：１混匀，通过花粉管通道法转入玉米自交系５７２和ＨＺ１７８中，通过Ｔｏ代草甘麟筛选获得１２个转基因株系，并对Ｔｏ代转基因植株进行ＰＣ民、ｄｄＰＣ民等分子检测，表明邸Ｗ、Ｃ尼口基因己经导入玉米自交系中，并且－５７２３７８－１。株系，证明左Ｐ靴基因在、ＨＺ１株系中属于单拷贝能够稳定遗传：ＣＸＯ基因关键词转基因玉张如；耐旱曲花粉管通道法０ＩＡｂｓｔｒａｃｔＤｒｏｕｇｈｔｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔ＾ｓｓｕｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｎｇａｇｒｉｃｕｌ化ｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｓｏｃｉａｌ

8、ｄｅｖｅ．ｌｏｐｍｅｎｔＴｅｍｐｏｒａｒｙｏｒｐｅｒｍａｎｅｎｔｄｒｏｕｇｈｔｃａｎｃａｕｓｅｍｏｒｅｄａｍａｇｅｔｈａｎａｎｙ