植物果肉总RNA试剂盒说明书

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1、杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F邮编：310030电话：0571-87381295传真：0571-87381297植物果肉总RNA试剂盒说明书产品组成植物果肉总RNA试剂盒Cat.No.5次样品510200550次制备5102050过滤柱核酸纯化柱β-巯基乙醇BufferRLPBufferWABufferWBRRNase-FreeWater说明书5套5套50μl3ml1.9ml1.5ml1.5ml1份50套50套500μl30ml12ml9.5ml2ml×31份产品储存与有效期试剂盒如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性

2、能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:technical@simgen.cn,电话：400-0099-857。产品介绍本产品不涉及酚氯仿的使用，适合从500mg含高糖分且多汁的植物组织中分离纯化总RNA。植物组织经裂解液溶解并释放RNA，补加乙醇后加入纯化柱，RNA结合在纯化柱上，溶解的蛋白与PCR抑制物则被过滤除去。RNA经两种洗液洗涤后，用RNase-FreeWater洗脱，即可用于RT-PCR，Northernblot，Dotblot，mRNA分离等各种分子生物学实验。用户需自备的试剂与物品1

3、．液氮、无水乙醇和70％乙醇。2．RNase-free1.5ml离心管3．移液器及吸头（为避免RNA酶的污染，建议选用含有滤芯的RNase-free移液器吸头）4．一次性手套及防护用品和纸巾5．台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子）6．研钵、旋涡震荡器7．无RNA酶使用的实验室使用前准备1）如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。2）每1mlBufferRLP中加入10µlβ-巯基乙醇，混合均匀。加入β-巯基乙醇的BufferRLC一个月内使用不影响实验结果。3）根据试剂瓶标签上的指示在BufferWA和BufferWBR中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作

4、好“乙醇已加”的标记。4）因为唾液、皮肤上均含有RNA酶，所以RNA的提取的全过程都需要戴乳胶手套和口罩。www.simgen.cn仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。Ver.1杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F邮编：310030电话：0571-87381295传真：0571-87381297操作步骤：1.在研钵中加入约2~5g植物组织和液氮，将组织研磨至粉末状，再用液氮预冷的1.5ml离心管称取450~500mg研磨成粉末状的组织。*研磨组织时应及时补加液氮，避免组织融化，以免内源性的RNA酶恢复活性而降解RNA。*勿使

5、用超过500mg组织，否则可能导致过滤柱堵塞，并使纯化的RNA中混有基因组DNA污染。*BufferRLP具腐蚀性，请戴防护用品进行操作。2.加入500µl已加入β-巯基乙醇的BufferRLP，旋涡振荡直至组织全部溶解。13000rpm离心2分钟。3.吸取≤700µl步骤2中的离心上清并转移到过滤柱中，盖上管盖，13000rpm离心1分钟。*此步骤可除去大部分基因组DNA，请勿省略。*如果溶解物不能全部滤过过滤柱，说明组织中核酸含量过高。此时应吸取300µl滤液转移到一个洁净的1.5ml离心管中，再加300µl70％乙醇到1.5ml离心管中并用吸头吸注6-8次混合均匀，然后将全部混合液

6、加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，13000rpm离心1分钟。过滤柱及残余的滤液则丢弃不用，然后直接进入步骤6的操作。4．弃过滤柱，向滤液中加入700µl70％乙醇并直接用吸头吸注6~8次混合均匀，吸取700µl混合液加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，13000rpm离心1分钟。*加入70％乙醇混合后如果有沉淀产生，请将沉淀一起加入到核酸纯化柱中。5.弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，吸取剩余的混合液加入到核酸纯化柱中，13000rpm离心1分钟。*滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml离心管在纸巾上倒扣拍击一次。6.弃2ml离心管中

7、的滤液，在核酸纯化柱中加入500µlBufferWA,盖上管盖，13000rpm离心1分钟。*确认在BufferWA中已经加入无水乙醇。7.弃2ml离心管中的滤液，在核酸纯化柱中加入600µlBufferWBR,盖上管盖，13000rpm离心1分钟。*确认在BufferWBR中已经加入无水乙醇。8.弃2ml离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml离心管中，14000rpm离心1分钟。*如果离心机的离心速度达不到14000rpm，则用