双基因ngf-ires-bmp2真核质粒转染大鼠bmscs诱导成骨的实验研究

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1、分类号Ｒ６８３．４学校代码１０６０１密级公开编号Ｙ１２００２１１３接各屋如戀硕±学位论文ＮＧＦ－－双基因ＩＲＥＳＢＭＰ２真核质粒转染大鼠ＢＭＳＣｓ诱导成骨的实验研究学科专业：骨外科￣￣研究方向：四肢创伤与骨组织工程研究生姓名：宇学号：Ｙ１２００２１１３学位类型科学学位￣￣导师姓名：＾ｍ涌教授二〇—五年五月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加ｙ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注；如没有

2、其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。％学位论文作者签名签字日期；年《月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全ｙ解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可１＾采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位

3、论文收录到《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名ｒ进导师签字；０确ｆ郑签字曰期：年／月〇曰签字曰期；７／又斗／月／目录双基因NGF-IRES-BMP2真核质粒转染大鼠BMSCs诱导成骨的实验研究…………………………………………………………………………………………………………...1中文摘要……………………………………………………...............................1ABSTRACT………………………………………………

4、……………………..2英汉缩略词对照表……………………………………………………………...5前言……………………………………………………………………………...61材料与方法…………………………………………………………………...71.1实验试剂与仪器……………………………………………………………71.2主要实验试剂………………………………………………………………81.3实验方法…………………………………………………………………..102结果………………………………………………………………………….182.1大鼠BMSCs形态学观察........................

5、.......................................................182.2大鼠BMSCs流式细胞鉴定………………………………………………………………………182.3western‐blot检测NGF与BMP2目的蛋白的表达………………………………….192.4免疫组织化学染色检测I型胶原蛋白的表达………………………………………….202.5转染后各组大鼠BMSCs培养14天后进行茜苏红染色并钙结节计数…213讨论……………………………………………………………………………………………………………234结论…………………………………………

6、………………………………………………………………….285参考文献……………………………………………………………………………………………………29综述……………………………………………………………………………………………………………….33攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………………………………….49致谢……………………………………………………………………………………………………………….50III双基因NGF-IRES-BMP2真核质粒转染大鼠BMSCs诱导成骨的实验研究中文摘要目的运用基因工程的手段将双基因真核质粒载体pCDNA3.1-NGF-IRES-B

7、MP2转染入大鼠BMSCs中，研究其诱导成骨后目的蛋白的表达情况方法取三月龄SD大鼠，颈椎脱臼处死后，通过全骨髓培养法分离培养大鼠BMSCs并稳定传代。倒置相差显微镜下观察细胞生长形态，运用流式细胞仪检测大鼠BMSCs表面标志物CD31、CD90。取第三代大鼠BMSCs，分为五组，单基因pCDNA3.1-NGF转染组（A组），单基因pCDNA3.1-BMP2转染组（B组），双基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2转染组（C组），空质粒组（D组），阴性对照组（E组）。运用