探索鹿茸活性成分的提取及一种新型微胶囊的制备

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1、天津大学博士学位论文鹿茸活性成分的提取及一种新型微胶囊的制备姓名：王金宇申请学位级别：博士专业：化学工艺指导教师：李淑芬20060101摘要鹿茸是传统名贵中药，具有温。肾壮阳、益精补血、强筋健骨等功效。鹿茸的化学成分比较复杂，含有多种重要的活性物质：如不饱和脂肪酸和溶血卵磷脂等具有降低血压、治疗心血管疾病的作用；对羟基苯甲醛(PHBD)、次黄嘌呤和磷脂等具有抑制单胺氧化酶(MAO)的作用；雌激素、孕酮等激素对女性更年期综合症有预防和治疗作用；胰岛素样生长因子．I(IGF．1)和生长激素(GH)可促进生长发育、用来治疗糖尿病、骨质疏松等疾病。现有的鹿茸加工方

2、式比较粗放，产品结构单一，为进一步拓宽鹿茸的市场应用空间，提高其附加值，本课题采用超临界流体萃取技术、超声波强化提取技术和其它蛋白质分离纯化技术，从鹿茸中提取三类功效明确、在临床上具有重要应用价值的活性成分；包括单胺氧化酶抑制剂、天然雌激素和IGF．1等活性多肽。采用动态法实验测定了PHBD在超临界C02中的溶解度；另外还对利用干酵母假cerevisiae)细胞作为囊壁材料制备微胶囊进行了初步研究。首先采用超临界C02萃取水炸干鹿茸中具有抗衰老作用的单胺氧化酶抑制剂。通过对萃取温度、萃取压力、夹带剂种类和原料粒度的考察，确立最佳萃取工艺条件，提取率可以达到

3、3．58％，萃取物对MAO-B的总抑制活性可以达到3319．13U／g。萃取物对MAO．B的抑制作用呈明显的量效关系：当萃取物溶液的浓度为278．15mg／L时，对MAO．B的抑制作用达到93．77％，但对MAO-A的抑制率只有24．18％。利用HPLC、11℃、GC、GC．MS和放射免疫分析等方法对萃取物的化学组成进行分析，萃取物中除含有对MAO有抑制作用的活性成分次黄嘌呤、对羟基苯甲醛和磷脂外，还含有不饱和脂肪酸、谷甾醇、维生素E、甾体化合物、胆固醇、雌二醇、睾酮和孕酮等物质。另外，采用超I艋界流体萃取和浓缩干鹿茸中的雌激素，雌二醇提取率可以达到O．3

4、342ng／g鹿茸。萃取物中雌二醇和孕酮含量分别为48．42ng／g和197．04ng／g，有望作为开发成预防和治疗女性更年期综合症产品的原料。采用超声波强化提取鲜鹿茸中的IGF．1。考察了溶液种类和pH、浸提温度、浸提时间、浸提液用量、浸提次数及超声功率等因素的影响。以pHl0．0的I号缓冲液作浸提液，IGF．1的提取率可以达到5279．29ng／g鲜茸。采用超声波强化提取具有提取率高、提取速度快的优点。选用10kDa的超滤膜，将IGF．1粗提液浓缩6～10倍，IGF．1损失率仅为2．49％，且超滤浓缩速度快。利用无水乙醇去除杂蛋白质的效果最佳，杂蛋白质

5、去除率为91．59％，IGF．1含量提高8．97倍，IGF．1损失率为24．52％。通过阳离子交换层析，总蛋白中IGF．1的含量提高了12．Ol倍，IGF．1和蛋白质的回收率分别为91．73％和66．85％。进一步通过SDS．P：AGE和高效毛细管电泳鉴定，表明鲜鹿茸提取液中含有IGF．1。另外，通过放射免疫分析法检测，鹿茸的IGF．1粗提液中还含有生长激素。以鹿茸冻干粉为原料，首先采用超临界纯C02萃取鹿茸中的单胺氧化酶抑制剂等脂类活性物质，然后采用溶剂浸提萃余物中IGF．1等活性多肽。结果表明，综合提取鹿茸中的脂类活性物质和IGF．1等多肽是可行性的。

6、利用动态法实验测定了对羟基苯甲醛(PHBD)在超临界c02中的溶解度，考察改变温度或压力对其溶解度的影响。当温度恒定时，PHBD在超临界c02中的溶解度随压力增加而增大；PHBD溶解度随温度变化趋势比较复杂。利用溶解度与压力和对比密度两个经验方程进行关联，关联误差在3．67～11％之间，表明这两个方程可用于PHBD在C02中溶解度的关联。利用PR—EOS计算值较实验结果有较大误差。分别以丁香油和水杨酸甲酯为囊芯，以干酵母细胞作为囊壁材料制备一种新型的微胶囊。通过对包埋温度、芯材比及包埋时间等因素的考察，确定了最佳制备工艺条件，微胶囊中丁香油包埋率可以达到4

7、1．26％，而水杨酸甲酯包埋率为48．58％。通过显微镜和电镜观察，微胶囊呈规则的球形，大小均一，直径在2．O～4．0岫之间。这种新型的微胶囊制备方式，具有操作简单、包埋率高、不引入有机溶剂的特点，适合制备药物、食品添加剂等囊芯的微胶囊。关键词：鹿茸，单胺氧化酶抑制剂，雌激素，胰岛素样生长因子．1，超临界流体萃取，超声波强化提取，微胶囊，干酵母细胞ABSTRACTAntlervelvethasbeenusedintraditionalChinesemedicinesforovertwothousandyears．Ithaslongbeenrecognize

8、dasoneofthemosteffectiveandpowerf