纤维素酶基因重组乳酸菌优化培养

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1、河南科技大学毕业论文纤维素酶基因重组乳酸菌的优化培养THEOPTIMALCULTUREOFCELLULASEGENERECOMBINEDLACTICACIDBACTERIA姓名武洪志院系动物科技学院专业动物科学指导教师李旺博士28/342011年6月1日毕业设计（论文）任务书（指导教师填表）填表时间：2011年1月10日学生姓名武洪志专业班级动科071指导教师李旺课题类型论文设计（论文）题目纤维素酶基因重组乳酸菌的优化培养主要研究内容1.采用逐步确定单一变量的设计和正交实验设计，将有可能影响到重组乳酸菌生长和纤维素

2、酶基因表达的培养基成分（碳源、氮源、盐浓度等），培养条件（温度、需氧厌氧、时间，pH值等）分别进行优化，计算优化前后细菌的生长速度，纤维素酶活力的变化。2.确定重组乳酸菌最佳培养条件。主要技术指标(或研究目标)1.通过本研究，对影响到重组乳酸菌生长和外源纤维素酶基因表达的条件进行优化，以确定其最佳的生长条件和产酶条件。2.本项试验查阅20篇以上与本题有关的文献资料；撰写不少于1万字的论文；中文摘要400字以上，且译成外文；独立完成1万字以上印刷字符与本题有关的外语译文。进度计划2011年1月查找资料2011年2月撰

3、写开题报告2011年3~5月上旬调查测定结果，分析数据2011年5月中下旬撰写论文2011年6月初论文答辩28/34主要参考文献1.孙军德，刘先.高产胞外多糖乳酸菌的筛选及培养条件优化.沈阳农业大学学报,2010,(01),90-932.王鹏飞，吴阳，卜宁等.畜禽粪水中乳酸菌的分离及其培养条件的研究.科技信息,2010,(02),132-1333.林伟涛，徐世明，吕家森等.中式发酵干香肠中乳酸菌的分离筛选、鉴定和培养.食品工业科技,2010,(01),194-197教研室主任签字：年月日纤维素酶基因重组乳酸菌的优化

4、培养摘要纤维素酶基因重组乳酸菌是通过分子生物学的手段在野生型乳酸菌基因组中整合入纤维素酶基因的一组重组菌，本试验通过采用逐步确定单一变量和正交试验相结合的设计，对影响重组菌生长的条件（碳源、氮源、酸碱度、培养时间、有氧无氧）进行优化，来确定其最佳的生长条件及最佳的产纤维素酶的条件。通过试验，最终确定其最佳生长培养基成分为：蔗糖10g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸出物5g，吐温801ml，柠檬酸二铵2g，CH3COONa·3H2O5g，磷酸氢二钾2g，盐液甲5.0ml，蒸馏水1000ml；最佳生长环境为：pH为

5、2.0~6.4，其中3.0最佳，培养温度为37℃，培养时间为26h，厌氧培养，此时纤维素酶重组乳酸菌的OD600值达到1.002。同时，对每次优化培养的乳酸菌发酵液通过测定纤维素酶活力来确定该重组菌的最佳产酶条件。试验结果为：37℃在乳酸菌选择培养基（MRS培养基）中厌氧培养26h，此时的酶活力达到0.258U/ml。本试验采用的逐步确定单一变量的设计对正交实验设计中的不足起到了弥补的作用，两种设计最终所得到的实验结果基本一致。通过本试验，初步对纤维素酶重组乳酸菌的生长条件和产酶条件进行探讨，为培养纤维素酶基因重组

6、乳酸菌和生产纤维素酶做准备。关键词：纤维素酶；基因重组乳酸菌，优化，最佳生长状况，产纤维素酶状况培养28/34THEOPTIMALCULTUREOFCELLULASEGENERECOMBINEDLACTICACIDBACTERIAABSTRACTCellulasegenerecombinedlacticacidbacteriaisarecombinedgerm,whichisintegratedthecellulasegenetothegenomeofwildtypelacticacidbacteriabymole

7、cularbiology,thisstudyusedthedesignoforthogonaltestandofgraduallydeterminesinglevariable,throughtheoptimalcultureoftheinfluencingvegetaltermsofrecombinedgerm,suchascarbonsource,nitrogensource,powerofhydrogen,cultivatingtime,oxygenconditionandsoon,tofindthetopg

8、allantgrowthconditionandproducingcelluaseoftherecombinedgerm.Throughtheexperiment,thetopgallantmediumcomponentscomeoutwithcanesuger10g,tryptone10g,beefextract10g,yeastextract5.0ml,