曲妥珠单抗—纳米金探针制备及对乳腺癌细胞体外生长抑制作用

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1、乘兩太聲医学硕壬学位论文曲妥珠单抗－纳米金探针制备及对乳腺癌细胞体外生长抑制作用专业名赖：临床睽学（肿瘤学）研究生姓名：苗凤真；刘渐导师姓名率苏宜－２０本论文得到江苏省基础研究计划（自然科学基金重点研究专项）（ＢＫ１１０％）的资助。Ｐｒｅａｒａｔ－ｐｉｏｎｏｆＨｅｒｃｅｐｔｉｎｏｌｄｎａｎｏｒｏｂｅａｎｄｇｐｉｔｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒｅｆｆｅｃｔｏｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｙＡＤｉｓ化ｒｔａｔｉｏ打Ｓｕｂｍｉｔｅｄ化Ｓｏ

2、ｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｏｒｔｈｅＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＢＹＭＬＡ．０ＦｅｎｚｈｅｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙＡｓｓｏｃｉａｔｅＣｈｉｅｆＰｈｓｉｃｉａｎ．ＬＩＵＬｉｎｙＰｒｏｆ．ＬＩＳｕｙｉＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆｏｎｃｏｌｏｐｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔ，ｙＡｐｒｉｌ２０１５东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位

3、论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研巧成果。Ｊ尽我所知，除了文中特别加＾ｌ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰！写过的研巧成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。三。取、ｆ研巧生签名：震風玉曰期：《东南大学学位论文使用授权声明东南大学、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印、中国科学技术信息研究所件和电子文档，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制

4、手段保存论文。本人电子文档的内容和一致，，纸质论文的内容相。除在保密期内的保密论文外允许论文被查阅和借阅可！＾公布（包括电子信息形式刊登）论文的全部内容或中。论文的公、英文摘要等部分内容布。（包括电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理研巧生签名＞凤１导师签名：：舊３中文巧要中文摘要曲妥珠单抗－纳米金探针制备及对乳腺癌细胞体外生长抑制作用目的－：构建新型曲妥珠单抗纳米金生物探针，研巧其对乳腺癌细胞的作用，探寻乳腺癌纳米祀向治疗新方法。方法：采用巧樣酸兰钢还原氣

5、金酸的方法制备不同尺寸（１０、ｎｍ２０ｎｍ和４０ｎｍ）金纳米粒子（ＧＮＰｓ），并斤透射电镜（ＴＥＭ）表征，同时４０ｎｍＧＮＰｓ还进行紫外可见吸收光谱、水动力Ｒ寸、ｚｅｔａ电位等检测。通过静电吸附原理将４０ｎｍＧＮＰｓ与曲妥珠单抗－Ｈｔ－（ｅｒｃｅｉｎ）偶联合成曲妥珠单抗纳米金（ＨｅｒｃｅｔｉｎＧＮＰｓ生物探针，表征方法同４０ｎｍｐｐ）ＧＮＰ－ｓｉ并采用ＢＣＡ蛋白定量法测ＨｅｒｃｅｔｉｎＧＮＰｓ中抗体偶联量。人乳腺癌细胞株ＢＴ４７４ｐ和ＭＣＦ－７细胞表皮生长因子受体－２２。（ＨＥＲ

6、）表适情况采用免疫细胞化学法检测采用扫面电子显微镜－（ＳＥＭ）观察ＢＴ４７４细胞膜表面的ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＧＮＰｓ吸附作用。分别设０ｎｍ￣置１、２０ｎｍ和４０ｒｎｎＧＮＰｓ浓度为１２．５１００惦ＺｍＬ４个浓度，分别巧置￣－仿ＨｅｒｃｅｔｉｎＧＮＰｓ和Ｈｅｒｃｅｔｉｎ浓度为０．５１０／ｍＬ５个浓度，并设置对照组和空白组，ｐｐｎｇ－ＭＴＴ法检测各沮细胞增殖抑制情况作用于ＢＴ４７４和ＭＣＦ７细胞４８ｈ，采用。分别设ｉ－置ＨｅｒｃｅｔｎＧＮＰｓ和Ｈｅｒｃｅｔｉｎ浓度为１．２５、２．

7、５、５ｉ／ｍＬ３个浓度，并设置对照组，采ｐｐｊｇ－用ＡｍｅｘｉｎＶＦＩＴＣ／ＰＩ双染、ＰＩ单染法行流式细胞术检测ＢＴ４７４细胞调亡率和周期变化ｉ－－ＭＡＰＫ－情况，Ｗ及采用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ技术分别检测ＰＡＫＴ、Ｐ、Ｂｃｌ２、ＨＥＲ２蛋白表达情况。结果：（１）巧樣酸还原法制备的不同尺寸ＧＮＰｓ（ｌＯｎｍ、２０ｎｍ和４０ｍｎ）水溶液呈酒红色，澄清透亮，ＴＥＭ结果显示ＧＮＰｓ近似圆形，平均粒径大小分别为１０．２±１．２ｎｍ、２０．９±２．０ｎｍ和４０．７±２．２ｎ

8、ｍ。通过紫夕ｈ可见吸收光谱、水动力尺寸、ｚｅｔａ电位、ＴＥＭ－－检测，证实成功合成ＨｅｒｃｅｔｉｎＧＮＰｓ探针，ＢＣＡ法测得每寒升ＨｅｒｃｅｔｉｎＧＮＰｓ探针抗ｐｐ，经计算得每个４０ｎｍＧＮＰ表面可Ｗ连接体偶联量为１１．３惦，抗体偶联率约为巧．６７％约６３３个Ｈｅｒｃｅｔｉｎ分子。ｐ（－２）免疫细胞化学方法证明人郭腺癌ＭＣＦ７细胞ＨＥＲ２低表达，ＢＴ４７４细胞ＨＥＲ２高