拟南芥黄萎病菌敏感型突变体的筛选与分析

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1、单位代码１０４７５学号１０４７巧１２０９８６分类号Ｑ巧Ｉ鄉為乂聲硕±学位论文拟南巧黄萎病菌敏感型突变体的筛逸与分析Ｉ－１：．—－＇－，Ｖ．．学科、专业：细胞生物学研究方向：植物生理生化申请学位类别：理学硕±申请人：常改幻：指导教师：安国勇教授二〇—五年五月关于学位论义独立完成和内容创新的声明本人初河南大学提出巧壬学化申请。本人部重声巧：所呈交的学位论丈是据我巧知，除独立？。本人在导巧的指导下完成的，对所刮巧的课题有新的见解论丈中

2、不包括■丈中特别加ｋ乂说明、标注和致谢的地方外，其他人已经发表或撰驾过的研究成果，也不包括其他人为获得巧何扳育、科研極無的学位或化书巧化巧过的材料一同工作的同事对本研見所做的任何贵献均居在论丈中巧。与我了明确的说明并表示了诚惠。菩邊：叛红学位申请人（学化论丈作老）释２／曰０年王月５支／关子学位论文著作枚使用授权书本人结河南大学审板批巧巧予巧去学位．巧力学位论丈的作者，本人完全河南大学有权向巧取了解并同患巧南乂学有关保留、使巧学世食丈的要來．即＇文（纸廊丈图书巧、

3、科研信息机相、歡据收集机构和本校图书巧等提供学位抵论、本和电子文本）＂拱公众流检索、查閲。本人巧权巧南大学出于宜展览学校巧学保术存发展和进行学术交等日的，可材义取影印、縮印、杠描和拷巧等复利手、汇編学位论丈（紙质丈本和电后子丈适巧本本）。撲化（涉及保密位內获容得的者学位论文在解密书）学（学位论义巧者）签左：解化知＿＿＿＿＿＿＿＿２０／足玉月龙指＾学化论导教坪嚴盗２０化年Ｊｒ＜沪＾５口SCREENINGANDANALYSISOFVERTICILLIUMDAHLIAE-SE

4、NSITIVEMUTANTSINARABIDOPSISTHALIANAADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByChangGaihongSupervisor：Prof.AnGuoyongMay，2015摘要棉花黄萎病是由黄萎病菌引起的一种土传病害，世界各大棉区均有分布，我国的棉花黄萎病主要由大丽轮枝菌引

5、起的。大丽轮枝菌寄主广泛，且容易发生变异，致病力分化较明显，致病机理复杂，目前缺乏有效的防治药物，再加上抗源材料的匮乏，使得棉花黄萎病的防治变得愈加艰难。运用现代分子生物技术培育抗病棉品种将成为解决这一难题的一个可行途径。当用大丽轮枝菌侵染拟南芥幼苗时，幼苗植株会出现子叶萎黄，花青素积累，植株发育矮小等典型的黄萎病症状。棉花的基因组庞大，生长周期长等特点，使得发掘棉花抗性基因的进展缓慢。而模式植物拟南芥因为基因组小等优点在研究棉花抗黄萎病的机制上具有很大的发展前景。本实验将T-DNA库的种子点于含琼脂浓度为0

6、.6%的MS培养基上，春化3d，培养12d后，将生长良好的幼苗移入土中，成熟后单株收种子并编号。因为课题组筛选的是敏感型突变体，而表型好的敏感型突变体多会因为发病严重而死亡。这个方法的优点就在于即使表型好的突变体死亡，也可以根据事先的种子编号进行下步实验。将收到的种子按编号点在含琼脂浓度为0.6%的MS培养基上，材料室生长8d后，将拟南芥幼苗5摆在含琼脂浓度为1%的MS培养基上，在幼苗的根尖处滴1μL浓度为5×10个孢子/mL的黄萎病菌孢子悬浮液，菌处理8-10d，拟南芥幼苗开始出现黄萎病的症状，这些是对黄萎

7、病菌敏感的突变体，将其移入土中观察其在土中的生长情况。本实验从突变体库中筛选到3株能稳定遗传的突变体：sr1、s63和s133，这为研究棉花的抗黄萎病机制提供了实验材料。正常培养基上生长8d的突变体sr1在培养基上接种8-12d后发病较野生型WT严重，植株叶片先是褪绿，接着萎黄后枯黄，接种20d后，子叶干枯程度较WT严重，植株生长发育矮小。将接种9d的幼苗移植到土壤生长22d后发现，和野生型WT相比其在土壤中生长受限，植株发育矮小，说明突变体sr1对黄萎病菌敏感。突变体sr1在培养基上病原菌处理12d后，从其

8、叶片中分离的菌落形成数量是野生型的8倍，说明突变体sr1对黄萎病菌敏感的原因是由侵入其体内的菌落数量所致。实验还发现突变体萌发较野生型要慢，根长明显短于野生型，抽薹时间比WT晚，后期生殖阶段和WT的差I异不显著。土壤中生长30d后，二者地上部分的鲜重区别不大，同时统计了二者的根长，发现差异不明显。进一步研究发现缺铵处理一定程度上能恢复突变体sr1的根长。实验还发现突变体根短的原因是伸长区细胞长度变短