慢病毒介导的shrna沉默cd151对luminal和basal-like型乳腺癌细胞生物学行为的影响及相关调控机制的研究

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1、ｗｍ參慢病毒介导的ｓｈＲＮＡ沉默ＣＤ１１－５对Ｌｕｍｉｎａｌ和Ｂａｓａｌｌｉｋｅ型乳腺癌细胞生物学行为的影响及相关调控机制的研巧ＴｈｅＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＣＤ１５１ＧｅｎｅＳｉｌｅｎｃｉｎｇＩｎｄｕｃｅｄｂｓｈＲＮＡｙｏｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ目ｅｈａｖｉｏｒｏｆＬｕｍｉｎａｌａｎｄＢａｓａｌ－ｌｉｋｅ目ｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓａｎｄｉｔｓＲｅｕｌａｔｏｒｙＭｅｃｈｎｉｓｍｇ作者姓名；刘婷专业名称；病理学与病理生理学研究方向：肿瘤间质病理学指导导师；李玉林教授学位类别；医学博±培养单位；

2、基础医学院论文答辩日期／／；年月＞日授予学位日期：年月日答辩委员会组成：游砰嚼巧名职称工作单位感狀私Ｗ吟么一－心心主庶间於著韓Ｉ娩憐＾正焉钓绒１寸與卿备、巧麵谤委员：Ｉｔ未亦於巧定户違霞茜夫等＇禾硬數袭達Ｊ■扬中Ｗ大營马？斗词良初藻啦爹ｉ餐瑞上（娘盗墙封妓楚＿Ｉ译娘＿乎１違外作泉巧陪ｇｙｔ啤＾碌正焉每中俾把络４瓜於嫂麥种入寒如之轉占／未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行、、何形式的复制修改发行、出任租、改编等有碍作者

3、著作权的商业性使用（但纯术性使学用不在）。否应承担侵权此限的法律责任。则，±吉林大学博（或硕±）学位论文原创性声明人郑重声：所呈交学位论文，是本人在指导教师本明的指导下，独立进行研工作所取得。己经注，究的成果除文中明引用的内容外本论文不包含任何其他个人或集体经发表或撰写过。已的作品成果对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中确方式明标。本明人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签：＞名１＾／？：〇日期年日月／中文摘要慢病毒介导的shRNA沉默CD151对Luminal和Basal-like型乳腺癌细胞生物学行为的影响及

4、相关调控机制的研究乳腺癌是来源于乳腺上皮组织的恶性肿瘤，严重威胁女性的健康和生命。由于乳腺癌细胞具有高度异质性，单纯病理分型已不能满足临床诊断和治疗的需要。近年来国内外专家越来越重视乳腺癌的分子分型，并且取得重大进展。乳腺癌的分子分型强调的是肿瘤个体的分子特征，有助于临床实施个体化治疗和准确判断预后。四次跨膜蛋白（Tetraspanins，TM4SF）是一个特殊的细胞膜糖蛋白家族，它的成员广泛分布于细胞和组织中，对细胞的生长和增殖、黏附和迁移、浸润和转移以及血管形成有调节作用。编码四次跨膜蛋白的基因绝大多数是抑癌基因，CD151被认为是为数不多的癌基因，它在多种肿瘤组织中高表达，与

5、预后负相关。CD151对HER2过表达型乳腺癌的影响及相关分子调控机制有报道，但对Luminal型和Basal-like型乳腺癌的影响及相关分子调控机制未见报道，为此本研究在检测乳腺癌CD151mRNA和蛋白表达的基础上，以代表Luminal型和Basal-like型的两种乳腺癌细胞为研究对象，通过慢病毒介导的RNA干扰和RNA-seq方法，探讨CD151对两种类型乳腺癌细胞生物学行为的影响并探讨可能的分子调控机制，为乳腺癌的分子靶向治疗提供实验依据和理论支持。方法：1.检测CD151在乳腺癌组织中的表达：用qPCR和IHC分别检测乳腺癌组织中CD151的mRNA和蛋白表达，并探讨

6、其与临床病理参数的相关性。2.检测CD151在乳腺癌细胞中的表达：用免疫荧光和WesternBlot分别检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-468及正常乳腺上皮细胞HBL-100中CD151蛋白表达。3.构建CD151-shRNA慢病毒表达载体并转染靶细胞：构建重组慢病毒载体，转染靶细胞，qPCR和WesternBlot检测沉默效果。4.检测CD151-shRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响：CCK8实验检测细胞增殖，流式技术检测细胞周期和细胞凋亡，划痕实验和Transwell实验检测细I胞的迁移和侵袭能力。裸鼠成瘤实验检测细胞成瘤及生长情况。5.CD151-shRNA对乳腺癌

7、细胞基因表达的机制研究：用RNA-seq技术检测沉默CD151基因前后的MCF-7和MDA-MB-468两组乳腺癌细胞的转录组，比较两组细胞转录组谱的差异，应用生物信息学方法（GO、KEGG富集分析）对全部DEGs进行功能注释和信号通路网络分析。qPCR验证具有明显差异的候选基因。结果：1.乳腺癌组织中CD151mRNA和蛋白的表达：qPCR和IHC结果显示CD151在乳腺癌组织高表达，与癌旁组织相比差异显著,具有统计学意义。CD151表达与淋巴结转移、高增殖指数正相