慢病毒介导shrna靶向沉默vegf-a乳腺癌细胞株的构建

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1、研究生个人简介朱琼，女，25岁，安徽省马鞍山市人2010年至今攻读徐州医学院肿瘤学硕士研究生就读研究生期间修满学分34分获得国家执业医师资格论文已通过盲审，同意答辩目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··3Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·6第一部分携带人VEGF．A基因干扰序列的慢病毒干扰质粒的构建与鉴定⋯⋯⋯·8第二部分慢病毒

2、的包装及高效ⅦGF．刖shRNA干扰序列的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯··19结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-40综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43攻读硕士学位期间发表学术论文题目⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··53临床培训小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯54致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57论文审阅认定书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58徐州医学院硕士学位论文缩略词黼BSAcDNA蛐sODEPCDMSOECMEDTAFBSFCMGFPHIFHⅣⅡNLBLvMMPmRNANr、仍0DoS英文全称Ampicillin缩略词表中文全称氨苄青霉素BovineSel"umalbumin牛血

4、清白蛋白ComplementaryDNADobledismledwaterDiethylpyrocarbonateDinlethylsulphoxideExlracellularmatrixEthylenediaminetetraacetieacidFetaIbovine$eruInFlowcytometryGreenfluorescentproteinHypoxia-induciblefactorHumanimmunodeficiencyvirusInterferonLuria．bertanimediumLentiviralvectorMatri

5、xmetaUoproteinaseMessengerRNAMierovesseldensityOpticaldensityOverallsurvival互补DNA双蒸水焦碳酸二乙酯二甲基亚砜细胞外基质乙二胺四乙酸胎牛血清流式细胞仪绿色荧光蛋白缺氧诱导因子人类免疫缺陷病毒干扰素LB培养基慢病毒载体基质金属蛋白酶信使RNA微血管密度吸光度总生存期徐州医学院硕士学位论文PBSPFSPL(源PNKRJSCRNAiItN豁eRT-PCRshRNAsiRNAVEGF．AVSVPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液Progression-fr

6、eesurvival无进展生存期Placentalgrowthfactor胎盘生长因子Polynucleotidekinase多核苷酸激酶RNA·inducedsilencingcomplexRNA诱导的沉默复合物RNA干扰核糖核酸酶Realtime-Polymerasechainreaction实时聚合酶链反应Shortha卸inRNA短发卡RNA小干扰RNAVascularendothelialgrowthfactorA血管内皮生长因子AVesicularstomatitisvirus水疱型口炎病毒2徐州医学院硕士学位论文慢病毒介导shRllA

7、靶向沉默VESF-／I乳腺癌细胞株的构建中文摘要目的通过构建血管内皮生长因子VEGF-A基因RNA干扰慢病毒载体，介导其对VEGF．A基因沉默，筛选并建立VEGF。A基因稳定下调的乳腺癌细胞株。方法1．设计三对靶向VEGF．A的shRNA表达序列并连接到慢病毒转移质粒pLB中，成功构建pLB．VEGF-A／shRNA质粒，并经PCR和测序鉴定；2．分别将构建的重组质粒与慢病毒包装质粒pCMVA8．91、被膜蛋白质粒pMD．G通过lipofectamine2000共转染至包装细胞293FT细胞，生产慢病毒颗粒，同时利用绿色荧光蛋白(greenfluo

8、rescentprotein，GFP)的表达水平来检测其滴度；3．包装产生慢病毒后感染乳腺癌细胞株MCF．7，经流式细胞仪