感染诱导猪肺炎支原体168株差异表达蛋白的筛选及鉴定

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1、－分类号Ｑ７８？学号２０圆巧ｉ素六聲全日制硕±学位论文－感染诱导猪肺炎支原体１６８株差异表达蛋白的筛选及鉴定姓名；王宏恩指导教师：邵国青研究员张映教授刘茂军副研究员学科专业：生物化学与分子生物学培养单位：动物科技学院中国？山西？太谷二０—五年六月ＳｈａｎｘｉＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙ＊Ｆｕ－ｔａ村ｏｎｌｌｔｉｍｅＭａｓｔｅｒＤｅｒｅｅＤｉｓｓｅｉｇＳｃｒｅｅｎｉｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｒｅｓｓｉｏｎｇｐｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆ

2、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ１６８ｓｔｒａｉｎｉｎｄｕｃｅｄｂｉｎａｃｔｉｏｎｙＮａｍｅ：ＨｏｎｅｎＷａｎｇｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＧｕｏｑｉｎｇＳｈａｏＰｒｏｆ．ＹｉｎＺｈａｎｇｇ乂ｓｓｏｃｉａ化Ｐｒｏｆ．ＭａｏｕｎＬｉｕｊ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＭａｗ：ｊＢｉｏｌｏｇｙＴｒａｉｎｉｎＵｎｉｔ：ＣｏｌｌｅｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄｇｇＶｅｔｅｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅｙＴａｉｕＳｈａｎｘｉＣｈｉｎａｇＪｕｎｅ２０１５

3、，学位论文原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文，是在导师指导下独立进行，研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容外本论文不包含，？任何其他个人或集体已经发衷或撰写过的作品成采。对本文研究做出过重要贡献的个人和集体均色在文中Ｗ明确方式标明。．，本人完全意巧到本声明的法律居果由本人承枉。作者签名（亲笔ｈ采旁戴如Ｉ長年＜月／＾日学位论文版奴使用授权书本学化论文作者完全了；§宇学核有关保留、使用学位论文的规定。即学位论文的知识产权属山西农业大学；同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的原件、复印件於电子腹；允许论文被查

4、阅和借闻；本人授权山西农业大学可レ乂将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可ｋ乂采巧影印、缩印或担描等复制手段保存、汇编学位论文。月／／日作者签名（亲笔）；矣爲震含年＾年月／厶１导师签名（亲著）：巧度火化＾本硏究由国家自然科学基金（Ｎｏ．３１３７０２０８）提供资助目录摘要１文献综述２１猪肺炎支原体致病机理及毒力因子研究进展２１．１猪肺炎支原体致病机理研究进展２１．２猪肺炎支原体毒力相关因子研究进展３２差弄蛋白质组学技术研究进展４２．１双向凝胶电泳技术４２．２巧光双向差异凝胶电泳技术５

5、２．３ｉＴＲＡＱ５獄２．４多维液相色谱技术５２．５同位素亲和标签技术６２．６蛋Ｓ质芯片技术６２．７质谱分析技术６２．８生物信息学分析６３差异蛋白质组学在Ｍｈｐ研究中的应用７Ｉｔｆ胃８一试验猪肺炎支原体１６８强、弱毒株感染ＳＴＥＣ细胞条件的筛选９１试验材料９１．１细胞、菌种及菌株培养基９１．２主要试剂９１．３主要仪器９１．４主要溶液配制９２试验方法１０２．１Ｍｈｐｌ６８强、弱毒株的复苏与扩大培养１０２．２ＳＴＥＣ细胞的培养１０２．３Ｍｈｐｌ６８强、弱毒株感染细胞

6、１０２．４感染剂量及感染时间１１２．５Ｍｈｐ全菌蛋白提取１１２．６１１Ｍｈｐ全菌蛋白浓度的测定２．７数据统计１１３结果与分析１２３．１Ｍｈｐｌ６８强、弱毒株感染量及感染时间的筛选１２４．小结１２试验二：感染诱导猪肖巾炎支原体１６８株差异表泣蛋白的筛选１２１试验材料１３１．１细胞、菌种及菌株培养基１３１．２主要试剂１３１３主要仪器１３１．４主要溶液及配制１３２试验方法１５２．１Ｍｈｐｌ６８菌株的培养１５２．２ＳＴＥＣ细胞的培养１６２．３Ｍｈ强、弱毒株感染细胞１６ｐ２

7、．４Ｍｈｐ菌体蛋白的制备与纯化１６２．５Ｍｈｐ全菌蛋白浓度的测定１７２．６菌体蛋白双向电泳１７２．７蛋白凝胶拍照及分析１８２乂蛋白样品的质谱样鉴定１８－２．９蛋白样品的Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ验证１９２．１０数据统计１９３结果与分析１９３．１感染前后Ｍｈｐｌ６８强、弱毒株蛋白双向电泳结果１９３－．２ＭＡＬＤＫＴＯＦＭＳ２０结果－３．３Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ结果公４小结２３－试验ＨＭｈｐｌ６８ＥＦＴＵ基因的原核