姚江水系中华鳖种质特征研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120103106上海海洋大学硕士学位论文题目：姚江水系中华鳖种质特征研究Germplasmcharacteristicsof英文题目：soft-shelledturtle(Pelodiscussinensis)fromYaojiangRiver专业：动物营养与饲料科学研究方向：中华鳖种质特征姓名：唐伟指导教师：钱国英（教授）二O一五年五月二十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文

2、不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年

3、月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注童微星浙大宁波理工学院副教授主席朱秋华浙江万里学院教授委员董迎辉浙江万里学院副研究员委员李彩燕浙江万里学院副教授秘书浙江万里学院生环学院答辩地点答辩日期2015.06.0264#205上海海洋大学硕士学位论文姚江水系中华鳖种质特征研究摘要中华鳖具有肉质鲜美、营养丰富等特点，自古以来都是我国传统食疗的滋补佳品。随着人们物质生活水平的不断提高，海内外市场对中华鳖的需求也越来越大，加速对中华鳖的人工繁殖和养殖已成为一个必然的趋势。近年来，随着生产中一些养殖户的不规范引种、倒种，不注重品种的

4、培育，导致中华鳖的品种混乱，遗传多样性降低。种质是产业的源头，是物种生命延续和种群繁衍的根本保证。为合理开发与保护中华鳖的种质资源，本研究以浙江省宁波市姚江流域的中华鳖群体为主要研究对象，首先对其染色体的制备方法进行了探究，并对核型及G-带做了准确的分析，旨在为中华鳖的性别研究及人工繁殖提供理论依据；然后采用RAPD及DNA条形码的方法，对姚江群体及其他5个地理群体（黄河群体、清溪花鳖、日本群体、太湖群体及清溪乌鳖）的中华鳖进行了遗传多样性分析，以期能对不同地理群体的中华鳖进行准确地鉴别。具体结果如下：在染色体核型分析方面，本研究发现，秋水仙素的注射量对中华鳖

5、的染色体制备有很大的影响，腹腔注射1µg/g（体重）秋水仙素，作用时间为1h比较适合中华鳖染色体标本的制备。用荧光显微镜和PhotoshopCS3软件对染色体配对分析，按LEVAN等标准进行染色体分类发现，中华鳖存在异形性染色体，其核型公式为2n=66=4m+4st+34sm+22T+ZZ/ZW；雄性的臂数为104，雌性为105；对比发现，雌雄染色体的相对长度差异不大。33对染色体中，1~6号为大染色体，其余均为小型染色体。用胰蛋白酶处理法制备了染色体G带，并绘制了1~6号染色体的G带模型图。在RAPD分析上，本研究采用筛选出的9条随机引物对中华鳖6个不同地理

6、群体的112个个体进行RAPD扩增分析。结果表明，9条10bp的随机引物在6个中华鳖群体中共扩增出156条带，其中多态性条带（P）为142（91.03%），仅14条带在6个群体中稳定出现，各群体的多态位点比例（P）在39.34~75.00%之间，Nei’s基因多样性指数在0.1144~0.2643之间，Shannon信息指数在0.1684~0.3934之间，各项遗传多样性指标中，姚江群体均处于最高水平，表明姚江群体具有较高的遗传多样性；在亲缘关系中，姚江群体与清溪花鳖间的关系最近，与黄河群体最远；基于电泳条带，未发现用于区分不同群体的特异性标记，但基于个体遗I

7、上海海洋大学硕士学位论文传距离构建的分子系统树，不同群体中华鳖在进化树上的聚类具有种的特性，因此可以通过进化树分析将各个群体区分开。在DNA条形码鉴别方面，根据已有的中华鳖COI基因序列片段，本研究设计了特异性引物进行中间片段、3’和5’RACE反应，得到了中华鳖COI基因全长为1635bp的序列，并以此设计用于DNA条形码分析的通用引物，对中华鳖6个地理群体的111个体及鳖科不同属间进行遗传多样性分析。结果表明，从1534bp的序列中，共检测到保守位点（C）928个，变异位点（V）606个，简约信息位点（Pi）337个，自裔位点（S）269个，各碱基平均含量

8、为A=30.10%、T=30.27%、