唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白、钙调磷酸酶表达的影响

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1、中图分类号：R782论文编号：HBLG2015-114UDC：密级：公开硕士学位论文唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白、钙调磷酸酶表达的影响作者姓名：林珏杉学科名称：口腔临床医学研究方向：口腔颌面外科学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期：2015年6月6日申请学位类别：医学硕士导师姓名：戚孟春教授单位：华北理工大学口腔医学院董伟讲师单位：华北理工大学口腔医学院论文评阅人：谢善培教授单位：唐山职业技术学院安峰教授单位：河北北方学院附属第一医院论文答辩日期：2015年6月6日答辩委员会主席：谢善培教授关键词：唑

2、来膦酸盐；钙调蛋白；钙调磷酸酶；破骨细胞唐山华北理工大学2015年6月TheeffectofzoledronateongeneexpressionofCalmodulinandCalcineurinduringosteoclastdifferentiationDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicin

3、ebyLinJueshan(ClinicalScienceofStomatology)ProfessorQiMengchunSupervisor:DongWeiJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：

4、日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的本研究旨在探讨在唑来膦酸对破骨细胞分化中参与钙信号传递的两个关键分子-Calmodulin和Calcine

5、urin基因表达的影响，探讨它们在唑来膦酸诱发的破骨细胞分化抑制中的作用。方法本实验首先建立了RAW264.7小鼠单核巨噬细胞株培养体系，用浓度为100ng/ml的RANKL（LigandofreceptoractivatorofnuclearfactorκB）诱导RAW264.7破骨细胞向分化。将细胞分为A、B两组，两组细胞均用RANKL诱导4天，而B组的细胞在第二天加入1×10-6M唑来膦酸处理48小时，4天后收获细胞。通过以下检测方法，研究唑来膦酸对破骨细胞分化中Calmodulin和Calcineurin基

6、因表达以及破骨细胞生成的影响：1抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色和牙本质磨片吸收陷窝检查，观察A组和B组之间的多核破骨细胞的形成和骨吸收功能的差异；2实时荧光定量PCR、Westernblot和免疫荧光细胞化学用来检测A组和B组破骨细胞的分化中Calmodulin和Calcineurin的mRNA水平；3使用磷酸酶活性试剂盒测定唑来膦酸对破骨细胞分化中Calcineurin活性的影响。结果1RAW264.7细胞经过RANKL诱导4d后，成功的分化为多核破骨细胞。2A、B组细胞均出现TRAP阳性多核破骨细胞，但是在

7、B组破骨细胞的生成受到明显唑来膦酸的抑制。B组的破骨细胞数量为26.7±3.5，与A组（49.0±2.6）相比有显著下降（P＜0.01），减少约44.9％。B组细胞在牙本质磨片上形成的骨吸收陷窝的数目和面积分别是6.7±1.2和997.1±14.8μm2，与A组（13.3±1.5和1676.9±24.9μm2）相比有显著地下降，分别降低了49.6%和40.5%。3、唑来膦酸也抑制了Calmodulin和Calcineurin的基因表达。通过Real-timePCR检测表明，B组中Calmodulin和Calcine

8、urin两个基因的mRNA水平与A组相比分别下降约51％和37％（P＜0.05）。Western-blot也显示，B组中的Calmodulin和Calcineurin的蛋白水平与A组相比显著降低（P＜0.05），分别减少了78.7%和69.5%。4、Calcineurin的活性分析又进一步证实了B组细胞中Calcineurin的活性在唑来膦酸处理后的24h，