哺乳动物上皮细胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用

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1、..W'vUw.:.、.•撕必■■''XcfA.秘、>，r.…-.'..SOOCHOWUNIVERSITYp..以=:以讲*W，_—V,v；W.v、、.AV,以此他知.‘二....一八n,il,•’;.：.々.紙vJW,：V，"硕士学位论文论文题目在登革病毒感染中的作用研究生姓名王娟娟指导教师姓名戴建锋专业名称免疫学研究方向抗感染免疫2015年4月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州

2、大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：王44日期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的規定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可

3、以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年_月解密后适用本规定。非涉密论文0论文作者签名：日期：娜-叫.-。1导师签名：日期：^/jt~哺乳动物上皮细胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用中文摘要中文摘要登革病毒（denguevirus,DENV）属于黄病毒科(Flavivirade)黄病毒属(Flavivirus)，是目前世界上分布最广泛的由蚊类传播的虫媒病毒。截至目前，还没有安全有效的疫苗或者抗病毒药物来治疗登革病毒引起的疾病。鞘糖脂是由神经酰胺和糖类构成的糖脂分子，普遍分布于真核细胞的膜类结构上。最近，有研究发现鞘糖

4、脂通过调节病毒感染宿主细胞的多个步骤来参与病毒感染。然而，鞘糖脂在登革病毒感染中的具体作用仍然不明确。在本研究中，我们采用小鼠黑色素瘤B16细胞和缺失鞘糖脂的突变体GM95细胞来研究鞘糖脂在登革病毒感染中的作用。结果发现与野生型B16细胞相比，缺失鞘糖脂的GM95细胞对登革病毒极不敏感：GM95细胞中病毒的复制水平，细胞上清中的活病毒量，都比野生型对照B16细胞中显著降低。用抑制鞘糖脂合成的抑制剂大豆皂苷或者PPMP来处理B16细胞，或者用RNAi的方法干扰B16细胞中三种主要鞘糖脂合成酶(mt3gal5,ma4GalTormb3GnT)，都能抑制登革病毒感染。

5、相反地，在GM95细胞中加入外源鞘糖脂GM3，能部分的恢复登革病毒感染。同时，我们发现B16细胞感染登革病毒后，代表性的酸性鞘糖脂GM3的含量显著上升，鞘糖脂合成酶基因的表达也显著上调。这些结果提示了鞘糖脂在登革病毒感染上皮细胞B16过程中发挥作用。为了研究鞘糖脂参与登革病毒感染细胞的具体机制，我们用病毒基因定量PCR测定和罗丹明染料标记登革病毒等方法，来研究B16和GM95细胞对登革病毒的结合和内吞效率。结果表明，GM95细胞结合和内吞登革病毒的能力与B16细胞相比并无显著性差异。进一步实验发现，鞘糖脂对登革病毒的RNA复制起重要作用。向B16和GM95细胞中

6、转染DNA型登革病毒复制子后，复制子在B16细胞中的复制水平显著地高于GM95细胞。此外，在登革病毒感染的B16细胞胞质中，病毒复制复合物的组成成分之一非结构蛋白NS4A与鞘糖脂GM3在内质网膜区域有部分共定位。这些实验数据表明，鞘糖脂不参与上皮细胞对登革病毒的结合和内吞作用，但影响病毒复制。靶向鞘糖脂的合成可成为潜在的抑制登革病毒感染的新思路。关键词：登革病毒；鞘糖脂；病毒复制复合物作者：王娟娟导师：戴建锋I英文摘要哺乳动物上皮细胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用GlycosphingolipidsiscriticalforDenguevirusreplicat

7、ion,butnotvirusbindingandentryAbstractDenguevirus(DENV),amemberoftheflavivirusgenusoftheFlaviviridaefamily,causesthemostprevalentarthropod-borneviraldiseaseofhumansworldwide.Currently,thereisnoapprovedvaccine,noranyantiviraldrugsforthetreatmentofdengue.Glycosphingolipids(GSLs),amphip

8、athicmolecul