化学诱导剂对寇氏隐甲藻油脂积累提高的代谢调控机理

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2、提高的代谢调控机理MetabolomicAnalysisRevealsEnhancingMechanismofChemicalInducersonLipidAccumulationinCrypthecodiniumcohnii领域：制药工程研究生：隋晓指导教师：陈磊副教授企业导师：刘璐高级研究员天津大学化学工程学院二零一五年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加标注和致谢之处外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也

3、不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。—：签字日期ｆ学位论文作者签名：％年月之公口ｊ：」学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可Ｗ将学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库迸行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编１＾＾供查阅和借阅。同意学校向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁撤。（保密的学位

4、论文在解密后适用本授权说明）：学位论文作者签名：导师签名签字曰期：Ｔ則年月巧曰签字曰期：年Ｊ月曰摘要多不饱和脂肪酸（Polyunsanturedfattyacid，PUFAs）作为人体必需脂肪酸对人体的生理功能和身心健康具有重要的意义。尤其是ω-3PUFAs中的二十二碳六烯酸（Docosahexaenoicacid，DHA）和二十碳五烯酸（Eicosapentaenoicacid，EPA）更是成为在生产和生活中应用广泛的高营养价值的脂肪酸。除了深海鱼油外，DHA也可以从微藻中提取。本文选

5、取寇氏隐甲藻（Crypthecodiniumcohnii）ATCC30772这种不饱和脂肪酸含量很高的海洋微藻作为生产藻株。利用多种外源化合物（丁基羟基茴香醚、没食子酸丙脂、生物素、苹果酸钠、洛伐他汀）添加实验的方法诱导促进藻细胞的油脂积累。通过诱导实验，除了没食子酸丙脂使总脂肪酸的含量减少之外，其它的外源化合物均使隐甲藻的总脂含量增加，增加比例分别为丁基羟基茴香醚（BHA）8.8%、生物素2.8%、苹果酸钠6.43%、洛伐他汀4.16%。为了探究总脂肪酸含量提高在细胞代谢水平上产生的变化，我们选取使

6、总脂肪酸提高比例最高的丁基羟基茴香醚添加实验作为研究对象，利用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）以及液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）进行了代谢组学的分析研究。通过主成分分析（PCA）获得与油脂积累相关的某些重要代谢物的含量变化，包括二磷酸腺苷（ADP）、NADPH、5-磷酸核糖（R5P）、磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）等重要化合物；通过热图展示了24种中心代谢物的含量变化；通过加权关联网络分析（WGCNA）分析获得8个与BHA添加相关模块以及9个关键代谢物（异麦芽糖、腺苷、对苯二酚、3-hydrox

7、ypropanoic-acid、L-异亮氨酸、L-脯氨酸、十四酸甲酯、亚油酸甲酯和丙二酸），通过这些分析结果揭示了与脂肪酸积累可能相关的代谢调控机理。关键词：多不饱和脂肪酸C.cohnii添加代谢组学LC-MSGC-MSABSTRACTAsessentialfattyacids,polyunsaturatedfattyacids(PUFAs)areofgreatsignificancetothephysiologicalfunctionandhealthofhuman.Amongthem,docosa

8、hexaenoicacid(DHA)andeicosapentaenoicacid(EPA)ofω-3PUFAshavehighnutritionalvaluesandhavebeenwidelyappliedasnutritionalsupplements.Inadditiontofishoil,DHAcanalsobeisolatedfrommicroalgae.Inthisstudy,westudiedtheoilproductionandaccu