副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性机制研究

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文副猪嘈血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性机制研究TheMechanismofHaemophilusparasuisCytolethalDistendingToxinsInducedCytotoxicity硕士研宄生：牛惠指导教师：王春来副研宄员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：动物疫苗及分子免疫学培养单位：哈尔滨兽医研宄所研究生院2015年5月密级:论文编号:中国农业科学院学位论文副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性机制研究TheMechanismofHaemophilusparasuisCytolethalDistendingToxin

2、sInducedCytotoxicity硕士研究生：牛惠指导教师：王春来副研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：动物疫苗及分子免疫学培养单位：哈尔滨兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationTheMechanismofHaemophilusparasuisCytolethalDistendingToxinsInducedCytotoxicityM.S.Candidate：NIUHuiSupervisor：AssociateProf.WANGChun-laiMajo

3、r：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:AnimalVaccineandMolecularImmunologyMay2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即

4、：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性机制研究预防兽医动物疫苗及论文作者牛惠专业研究方向学分子免疫学指导教师王春来培养单位（研究所）哈尔滨兽医研究所硕姓名职称单位专业签名（博）评硕导□导师姜平教授南京农业大学预防兽医学博导阅张茂硕导□人教授吉林农业大学预防兽医学林博导答辩李一硕导□

5、教授东北农业大学预防兽医学主经博导席硕导□周锐教授华中农业大学预防兽医学博导涂长研究硕导□军事兽医研究所预防兽医学春员博导答倪宏硕导□黑龙江八一农垦大教授预防兽医学波博导学辩李广硕导□教授东北农业大学预防兽医学兴博导委硕导□凌红教授哈尔滨医科大学预防兽医学博导员仇华研究硕导□哈尔滨兽医研究所预防兽医学吉员博导硕导□博导□会议记录（秘书）于申业论文答辩时间地点2015.5.21哈尔滨兽医研究所主楼三楼学术报告厅中国农业科学院硕士学位论文摘要副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis，H.parasuis）是引起副猪嗜血杆菌病的病原，该病主要表现为多发性浆膜炎、关节

6、炎及脑膜炎。细胞致死膨胀毒素（Cytolethaldistendingtoxin，CDT）是H.parasuis的重要毒力因子，由CdtA、CdtB和CdtC3个亚基组成。为研究副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素（HpCDT）对宿主细胞的毒性作用，本研究以猪肺泡巨噬细胞（PAM）和PK-15细胞为模型，运用流式细胞术、激光共聚焦、免疫印迹、荧光定量PCR等方法进行毒素与细胞的互作研究。通过Predsi、Signal-Blast和Signal-3L软件预测CdtA，CdtB和CdtC的信号肽，结果显示其信号肽分别为N端1-19aa、1-21aa和1-19aa。去掉信号肽后成功地以可溶形式表达了

7、3种重组蛋白。纯化的CdtB在体外能够剪切环状或线性DNA，表明其具有DNase活性；在体内纯化的CdtB能够诱导PK-15细胞产生γ-H2A.X，说明其具有DNase活性，并引起了DNA双链断裂。经流式细胞仪分析重组蛋白处理的细胞周期和凋亡情况，结果表明单独的CdtB能够引起PAM和PK-15细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡，而在CdtA或/和CdtC的帮助下能够更显著地增强这种作用。进一步研究结果表明CDT全毒素能够引起最显著的细胞膨胀、细胞周